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土壤纖維素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                          微量法100管/48樣

注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

S-CL主要來(lái)源于土壤微生物，S-CL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

測(cè)定原理：

采用蒽酮比色法測(cè)定S-CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體40mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存； 臨用前加入5mL蒸餾水和45mL濃硫酸充分溶解待用。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。

加樣表和測(cè)定步驟：

37℃振蕩反應(yīng)3h后，90℃水浴15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后

8000g 25℃離心10min，取上清，得糖化液

混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，測(cè)620nm下吸光值A，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-CL活力計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.5090x - 0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷2.5090×V反總÷W÷T =38.3×(ΔA+0.0462)

T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。

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