木質(zhì)素（Lignin）含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100管/96樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇構(gòu)成的一類物質(zhì)，存在于木質(zhì)組織中，主要作用是通過(guò)形成交織網(wǎng)來(lái)硬化細(xì)胞壁。木質(zhì)素主要位于纖維素纖維之間，起抗壓作用。
測(cè)定原理：
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙?；笤?/span>280nm處有特征吸收峰，280nm的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
需自備的儀器和用品：
天平、40目篩，玻璃試管、燒杯、離心機(jī)，恒溫水浴鍋、封口膜、烘箱、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸，濃硫酸。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體100mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理：
樣品80℃烘干至恒重，粉碎，過(guò)40目篩，稱取約2mg（記為W）于10mL玻璃試管中（務(wù)bi用玻璃試管，不可用Ep管）
測(cè)定操作表：
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣本（mg） | 2 | |
試劑一（μL） | 500 | 500 |
高氯酸（μL） | 20 | 20 |
于10mL玻璃試管中，用封口膜密封，充分混勻，80℃水浴40min，每隔10min震蕩一次，然后自然冷卻 | ||
試劑二（μL） | 500 | 500 |
充分混勻 | ||
上清（μL） | 20 | 20 |
試劑三（μL） | 980（參照注意事項(xiàng)四） | 980（參照注意事項(xiàng)四） |
取200μL于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定280nm處吸光值A。分別記為A空白管和A測(cè)定管，ΔA=A測(cè)定管-A空白管 | ||
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0347x+0.0068，R2=0.9889
Lignin（mg/g干重）= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反總×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50
V反總：反應(yīng)總體積：1.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：稀釋倍數(shù)
注意事項(xiàng)：
1. 試劑一有毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。
2. 加熱過(guò)程中有劇烈反應(yīng)，震蕩時(shí)輕搖，以免壓力過(guò)大噴出造成人身傷害。
3. 試劑三具有強(qiáng)刺激性，建議操作過(guò)程全部在通風(fēng)櫥子操作。
4. 取上清加試劑三步驟根據(jù)自己樣品乙?；潭?，試劑三的用量可調(diào)整，保證吸光值在0.1-0.8之間即可，并在公式中參與計(jì)算。
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