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| 參考價(jià) | ￥160-￥310 |
參考價(jià)：￥160 ~ ￥310
100管/48樣 50管/24樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現(xiàn)貨 規(guī)格:100管/48樣、50管/24樣 貨號(hào):YLK-SH131 應(yīng)用領(lǐng)域:化工,生物產(chǎn)業(yè) 主要用途:科研
>| 100管/48樣 | 310元 | 114盒可售 |
| 50管/24樣 | 160元 | 132盒可售 |
更新時(shí)間：2024-06-29 08:32:39瀏覽次數(shù)：856評價(jià)
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| CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣、50管/24樣 |
| 貨號(hào) | YLK-SH131 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 測定方法： | 微量法、可見分光光度法 |
酸性磷酸酶（ACP）活性測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機(jī)磷酸，常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。
測定原理：
在酸性環(huán)境中，ACP催化對硝基苯磷酸二鈉水解生成4-硝基苯/酚，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm吸光度增加速率，來計(jì)算ACP活性。
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體60 mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：液體50 mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體50 mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1 mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、10000g離心10 min，取上清液待測。
2. 細(xì)菌或細(xì)胞：按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1 mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3 min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血液可直接測定，或者適當(dāng)稀釋后測定。
測定：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 10 | 10 |
試劑一 | 90 | 990 |
試劑二 | 900 | |
30℃避光保溫30 min | ||
試劑三 | 400 | 400 |
混勻，吸取 200µL 加入96 孔板中，405 nm 下測定各管吸光值。ΔA=A測定管-A對照管。
注意：每個(gè)測定管需做一個(gè)對照管。
ACP活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線 y = 7.3336x + 0.0179；R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。
1. 血液中ACP活性計(jì)算
活性單位定義：30℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯/酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mL)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V反總÷T÷V樣
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）
2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中ACP活性計(jì)算
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：30℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol 4-硝基苯/酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(V樣×Cpr)
=0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：30℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯/酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W
（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：30℃中每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯/酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷細(xì)胞數(shù)量
V反總：反應(yīng)體系總體積（mL），1 mL； W ：樣品質(zhì)量，g； V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積（mL），0.01 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），30 min；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
注意事項(xiàng)：
ACP不穩(wěn)定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當(dāng)天準(zhǔn)備；血清樣品中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
酸性磷酸酶（ACP）活性測定試劑盒僅供科研！
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