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更新時(shí)間：2024-07-18 08:45:25瀏覽次數(shù)：406評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | YLK10394P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 保存條件 | 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 |
| 有效期 | 12個(gè)月 | 試劑盒說(shuō)明 | 不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用 |
犬副流感病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒
產(chǎn)品名稱(chēng)：犬副流感病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒
英文名稱(chēng)：Canine Parainfluenza Virus(CPIV) Probe qRT-PCR Kit
犬副流感病毒(Canine Parainfluenza Virus，CPIV)是一種 RNA 病毒，會(huì)引起感染，是一種感染示犬的主要的呼吸道傳染病。感染后臨床表現(xiàn)發(fā)熱、流涕和咳嗽。病理變化以卡他性鼻炎和支氣管炎為特征，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品以探針?lè)晒舛?RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)犬副流感病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)犬副流感病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒的
RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
【試劑組成】
成分 | 十孔盒包裝 |
探針?lè)?/span> qRT-PCR 緩沖液 | 500μL（藍(lán)蓋） |
探針?lè)?/span> qRT-PCR 酶混合液 | 100μL（紅蓋） |
熒光PCR 專(zhuān)用模板稀釋液 | 1 mL（黃蓋） |
犬副流感病毒探針?lè)?/span> qRT-PCR 引物混合液 | 100 μL（白蓋） |
犬副流感病毒 qRT-PCR 探針 | 50 μL（棕色管） |
犬副流感病毒探針?lè)?/span> qRT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL（黃蓋） |
使用手冊(cè) | 1 份 |
【運(yùn)輸及保存】低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。
【自備試劑】樣品 RNA。
【注意事項(xiàng)】
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。
1. 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原， 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專(zhuān)用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL 陽(yáng)性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣， 以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分
四、數(shù)據(jù)處理
11. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
12. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct
值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 35，則為陽(yáng)性。
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