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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | YLK10402P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研實驗 | 保存條件 | 低溫運輸，-20℃保存 |
| 有效期 | 12個月 | 試劑盒說明 | 不同批號的試劑盒組分不可交互使用 |
人乳頭瘤病毒16（HPV-16）PCR試劑盒
產(chǎn)品名稱：人乳頭瘤病毒16（HPV-16）PCR試劑盒
英文名稱：Human Papillomavirus 16 (HPV-16) PCR Kit
人乳頭瘤病毒是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒 A 屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現(xiàn)為尋常疣、生殖器疣（尖銳濕疣）等癥狀。 隨著性病中尖銳濕疣的發(fā)病率急速上升和宮頸癌、肛men癌等的增多，人乳頭瘤病毒（hpv）感染越來越引起人們的關(guān)注。HPV16 是高危型病毒，有宮頸癌傾向，是癌前病變。因此快速檢測人乳頭瘤病毒 16 具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人乳頭瘤病毒 16 ，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
【試劑組成】
成 份 | 包裝 |
2×PCR Magic Mix 3.0 | 500 μL（綠蓋） |
超純水 | 1 mL（白蓋） |
人乳頭瘤病毒 16 PCR 引物混合液 | 100 μL（紅蓋） |
人乳頭瘤病毒 16 PCR 陽性對照（1×10E6 拷貝/μL） | 50 μL（黃蓋） |
使用手冊 | 1 份 |
【運輸及保存】低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。
【自備試劑】樣品RNA。
【注意事項】
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸/提取試劑盒兼容。
2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 人乳頭瘤病毒16 PCR 陽性對照而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板DNA放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（20μL 體系）
3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個PCR 管中分別加入下列成分
成分 | N+2 個 樣品管 | PCR 陰性 對照 | PCR 陽性 對照 |
2×PCR Magic Mix 3.0 | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
人乳頭瘤病毒16 PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個樣品 DNA 模板 | 各 8 μL | - | - |
PCR 陰性對照（水） | - | 8 μL | - |
PCR 陽性對照（人乳頭瘤病毒16 PCR 陽性對 照的 10倍稀釋液） |
- |
- |
8 μL |
4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：
過程 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
PCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)） |
95℃ |
15 sec |
60℃ |
60 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測
5. 取 5-10 μL 擴(kuò)增產(chǎn)物就行常規(guī)瓊脂糖電泳，檢測擴(kuò)增效果，由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短，建議用1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。
6. 陽性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長度為200bp左右。如果兩個陰性對照有此擴(kuò)增產(chǎn)物，說明環(huán)境污染，則整個實驗無效，不需要分析實驗結(jié)果。
7. 如果所有樣品和PCR陽性對照均無此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明有系統(tǒng)性的問題（試劑、設(shè)備、程序、操作等），需要重復(fù)并排查原因。
8. 如果沒有上述兩種情況，則實驗有效，可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2個樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽性，無則判定為陰性。
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