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中文名稱：單細胞裂解液 (DNA型)

英文名稱：Single Cell Lysis Solution（DNA）

產(chǎn)品及特點

單細胞裂解液（DNA 專用）是單細胞DNA 提取專用裂解液，產(chǎn)品經(jīng)過多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞，維持核酸的穩(wěn)定性。單細胞裂解物可以直接用于測序和RT-PCR 等試驗。本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上。

規(guī)格及成分

運輸及保存

低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑

PBS 溶液

使用方法

如何制備單個細胞取決于實驗樣品和實驗者所擁有的儀器設(shè)備，此處所列步驟僅針對培養(yǎng)細胞、實體組織、淋巴細胞和卵裂球（2-8 細胞胚胎）等材料，對其他材料（如干細胞克隆、胚囊、胚胎組織等），用戶需自行選用合適的方法制備單細胞。對已經(jīng)處于單細胞懸浮狀態(tài)的細胞（如 FACS 分離細胞、卵細胞等），則可以跳過制備過程而直接進入單細胞裂解步驟：

一、用培養(yǎng)細胞或?qū)嶓w組織制備單細胞：

1.    按常規(guī)胰酶方法處理培養(yǎng)細胞或組織，將細胞重懸于自備的液體細胞培養(yǎng)基中。

2.    按常規(guī)方法對細胞進行計數(shù)。

3.    轉(zhuǎn)移 100-4000 個細胞到新離心管中，400 g 離心 4 分鐘沉淀細胞，小心棄上清（培養(yǎng)基）。

4.    將細胞沉淀重懸于 50 uL 自備的 PBS 溶液中，使其終濃度為 2-80 個細胞/uL。

5.    在干凈的培養(yǎng)皿上點加數(shù)個含 5 uL PBS 溶液的小液滴，加入 5 uL 細胞懸浮液到第一個小液滴中，然后再從第一個小液滴中轉(zhuǎn)移 5 uL 到第二個小液滴，如此系列稀釋樣品數(shù)次，使得其濃度接近每 2.5 uL 液體中含 1 個細胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8 細胞胚胎）制備單個細胞：

6.    在培養(yǎng)皿中點數(shù)個含 5 uL 胚胎裂解液（需要從本公司另購）的小液滴。

顯微鏡下用微量注射液加入一個卵裂球到一個胚胎裂解液小液滴中。

8.    轉(zhuǎn)移幾次到后面的幾個液滴中以便將帶入的培養(yǎng)基稀釋掉。

9.    在最后一個液滴中，卵裂球的幾個細胞將彼此分開成單個細胞。

10.  取單個細胞，轉(zhuǎn)移到數(shù)個含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗滌掉胚胎裂解液。

11.  在顯微鏡下用顯微注射儀取只含一個細胞的 2.5 uL 樣品并轉(zhuǎn)移到一個200 uL 的PCR 管中待用。同時設(shè)置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含細胞）。

三、用單細胞裂解液裂解細胞

12.  在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 uL 樣品，確認含一個細胞后，將其轉(zhuǎn)移到一個含 2.5 uL 單細胞裂解液的PCR 管中。最好同時設(shè)置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含細胞）。

13.  在 2.5 uL 樣品中，顯微鏡下細胞懸液可直接用于單細胞裂解反應(yīng)。

14.  裂解后可以放冰上待用，如果長期不用，可以放-80℃保存。四、單細胞裂解物的PCR 擴增

15.  細胞裂解物從-80℃中取出后，65℃保溫 10 分鐘，取出后放冰上待用。

16.  以一半或全部上步操作得到的細胞裂解物為模板，按常規(guī)方法進行 PCR

反應(yīng)。