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反相液相色譜結(jié)合柱前衍生化法測定人血清中L-門冬酰胺
氨基酸是蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位，是人體完成生理功能的必須物質(zhì)，人類許多疾病的發(fā)生和發(fā)展與血液循環(huán)中氨基酸的變化有密切聯(lián)系。因此，血液中氨基酸水平在臨床中可作為一些疾病的診斷指針。監(jiān)測體內(nèi)氨基酸水平的變化，對疾病的診斷和治療有重要參考價值。
門冬酰胺是機(jī)體合成蛋白質(zhì)的重要氨基酸之一，在體內(nèi)可水解為門冬氨酸和氨，體內(nèi)正常細(xì)胞也可通過門冬酰胺合成酶合成L-ASN。1996年，Yellin and Wriston研究發(fā)現(xiàn)淋巴瘤細(xì)胞中門冬酰胺合成酶活性低，不能合成足夠的L-ASN，必須從血液循環(huán)只能獲取L-ASN以合成蛋白質(zhì)，門冬酰胺酶能催化L-ASN水解，迅速耗竭血液循環(huán)中的L-ASN，使腫瘤細(xì)胞不能獲得足夠的L-ASN導(dǎo)致蛋白合成抑制而凋亡，故門冬酰胺酶對淋巴瘤細(xì)胞有選擇性細(xì)胞毒作用。目前，天然的火聚乙二醇修飾的ASNase已成為兒童急性淋巴細(xì)胞白血病聯(lián)合化療方案中的重要組成部分，對維持患兒持續(xù)*緩解（CCR）起著不可替代的作用。
本文建立網(wǎng)絡(luò)鄰苯二甲醛柱前在線衍生反相液相色譜法，在方法學(xué)建立時采用L-ASN耗竭空白人血清作為空白生物基質(zhì)，能夠快速、準(zhǔn)確測定人血清中L-ASN，在臨床研究中可用于監(jiān)測ASNase治療過程中患兒體內(nèi)L-ASN的耗竭程度，為優(yōu)化給藥方案，降低不良反應(yīng)提供重要依據(jù)。
儀器準(zhǔn)備
儀器簡介
LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時控制數(shù)臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等，實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。
應(yīng)用領(lǐng)域
化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析
色譜條件：
色譜柱 | Agilent ZORBAX Zclipse AAA（4.6mm×150mm，5μm） |
流動相 | A:0.01mol.L磷酸鹽緩沖液（pH=7.8） B：水-甲醇-乙腈（10:45:45） |
梯度洗脫程序 | 0-17min，29%B,18-32min，100%B，33-37min，29%B； |
進(jìn)樣量 | 15μL |
流速 | 1ml/min |
測定結(jié)果：
