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超液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定鼠尿中17種人生皂苷
人參皂苷是人參屬藥材的活性成分，目前已經(jīng)分離出多達(dá)30余種不同的人參皂苷，他們含有兩個(gè)主要的苷元：原人參三醇（PPT）或原人參二醇（PPD）。人或動(dòng)物攝入后，在血漿和尿液中可檢測到它們的存在。由于人參皂苷的生物活性可能是多種皂苷在體內(nèi)協(xié)同作用的結(jié)果，因此，同時(shí)分離和測定多種人參皂苷對于研究人參皂苷的藥理和毒理學(xué)機(jī)理具有重要意義。
檢測時(shí)可以對雄性大鼠進(jìn)行人參皂苷喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。將采集的新鮮尿樣樣品離心，去除固體雜質(zhì)，上清液經(jīng)固相萃取后，經(jīng)過超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定。內(nèi)標(biāo)法定量，方法的檢出限為2~18ng/mL，回收率74.9%~94.5%，皂苷種類不同回收率不同。
使用儀器：超液相色譜儀（配有串聯(lián)四級桿質(zhì)譜檢測器）；液體均勻器；離心機(jī)；氮吹儀；固相萃取小柱。
測定方法：購買8只8周的雄性大鼠，進(jìn)行1~13d人參皂苷喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。每日飼喂量是100mg/kg。在第0d取空白尿樣，在第7，10,13d取待測尿樣。
將采集的新鮮尿樣在室溫下以3500r/min迅速離心10min，以除去固體污染物，上清液于—20℃保存。
用1mL甲醇和2mL水平衡固相萃取柱，以后在真空下將700μL尿液上清液和50μL內(nèi)標(biāo)液過柱，用水淋洗小柱5次并吹干。用甲醇水溶液洗脫柱上的人參皂苷，洗脫2次，每次0.2mL，合并洗脫液。在4℃、20000×g離心10min，用超液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析。