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HPLC固定相：疏水性相互作用固定相
閱讀：1558 發(fā)布時(shí)間：2016-1-20
疏水性相互作用色譜（HIC）是為了適應(yīng)活性生物大分子，特別是蛋白質(zhì)的分離而發(fā)展起來(lái)的一種液相色譜方法。
分離機(jī)理與反相色譜的強(qiáng)疏水性作為類型，但是其分離機(jī)制更多地依賴于溶質(zhì)與填料表面之間弱的疏水性相互作用。HIC柱填料的表面具有弱疏水性特征，在高離子強(qiáng)度流動(dòng)相條件下，蛋白質(zhì)分子中的疏水性部分與填料表面產(chǎn)生疏水性相互作用而被吸附，當(dāng)流動(dòng)相的離子強(qiáng)度逐漸降低時(shí)，蛋白樣品則按其疏水性特征被依次洗脫，疏水性越強(qiáng)，洗脫的時(shí)間越長(zhǎng)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分離。與反相色譜比較，HIC方法避免了流動(dòng)相中使用大量有機(jī)溶劑，能有效的保持被分離物質(zhì)的生物活性，因此在生化樣品的分離純化方面被廣泛采用。
常見(jiàn)的商品鍵合相HIC填料基質(zhì)材料包括硅膠和高聚物兩種。高聚物基質(zhì)包括多糖型凝膠和合成高聚物微球等。
為了提高基質(zhì)表面的疏水性，可以采用鍵合羥丙基、甲基、丙基、丁基、苯基、戊基、苯甲基等段煉烷烴的方法，也可以在硅膠上先鍵合上環(huán)氧丙氧基三乙氧基硅烷，再在路易斯酸催化下接上短鏈烷氧基制成醚型鍵合相；將聚乙二醇與環(huán)氧化硅膠反相，則可制備出聚乙二醇型HIC填料。