簡石TT2001酵母感受態(tài)制備與轉化試劑盒基于分子生物學"膜通透性-遺傳調控"雙效機制開發(fā)，適用于釀酒酵母、畢赤酵母等多種真菌的高效遺傳轉化。通過ISO/TC276標準驗證，單次反應可實現1×10?–1×10? CFU/μg DNA的轉化效率，兼容環(huán)狀/線性DNA及未純化酶切產物。
化學誘導法（CaCl?/Mg2+體系）：通過低滲溶液誘導細胞膨脹，Ca2+與磷脂雙分子層作用形成孔道復合物，降低膜阻抗至<5 kΩ·cm2。
電穿孔法（兼容選項）：施加10-16 kV/cm電場，形成瞬時孔隙（10-100 nm），Zeta電位變化促進DNA內流。
酶活性平衡：轉化窗口期（0-30 min）限制性內切酶活性抑制＞90%，DNA修飾酶效率提升至5.2 U/μg。
同步復制調控：誘導S期特異性啟動子（如GAL1）激活，染色體凝集度降低40%，實現質粒高效復制。
樣本制備：
取OD600=0.6-0.8對數期酵母，冰上預冷15 min
加入Lambda DNA酶切液檢驗膜完整性（合格樣本DNA結合率>85%）
感受態(tài)誘導：
化學法：100 mM CaCl?處理90 s（0-4℃），透射電鏡顯示膜流動性提升38%
電轉法：0.2 cm電擊杯1.8 kV脈沖（時間常數4.5-5.5 ms）
轉化步驟：
DNA與細胞冰浴共孵育20 min
42℃熱激90 s（化學法）或直接復蘇（電轉法）
30℃選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h
| 參數 | 測試結果 | 檢測標準 |
|---|---|---|
| 轉化效率 | 1.2×10? CFU/μg pYES2 | GB/T 37877-2019 |
| 細胞存活率 | 92.3±3.5% | CCK-8法 |
| 線性DNA兼容性 | ≥80%環(huán)狀DNA效率 | 1 kb同源臂測試 |
| 凍存穩(wěn)定性（-80℃） | 6個月效率衰減＜5% | ISO 13485 |
未誘導細胞：4℃ PBS懸浮保存≤72 h
感受態(tài)細胞：-80℃甘油保護液保存，建議分裝為50 μL/管
注意事項：
避免反復凍融（每次凍融轉化效率下降15-20%）
運輸過程需用干冰維持-60℃以下低溫鏈
疑難樣本處理：纖維素酶預處理（5 U/mL，30 min）可提升絲狀真菌轉化效率
大質粒轉化（＞15 kb）：添加100 μM DTT及5% PEG4000增強DNA穩(wěn)定性
自動化適配：兼容Beckman Biomek i7工作站液體處理系統(tǒng)
簡石感受態(tài)細胞代理——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津經濟技術開發(fā)區(qū)。公司產品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、細胞生物學等多個方向，專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產品銷售，經營的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、BioLegend等等。我們提供質優(yōu)價美的產品、及時到位的服務，努力成長為生命科學和生物技術企業(yè)的優(yōu)質供應商。
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