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            原位雜交技術(shù)原理及分類
            
        			
            閱讀：392      發(fā)布時間：2024-12-7
        				
            
							
				
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             原位雜交技術(shù)（In situ hybridization，ISH）是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù)，以下是該技術(shù)的原理及分類：
            基本原理
            原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸（即探針）與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。
            技術(shù)分類
            RNA原位雜交：又稱RNA原位雜交組織化學(xué)，是指運(yùn)用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細(xì)胞和組織內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理是：在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下，用標(biāo)記的已知的RNA核苷酸片段，按核酸雜交中堿基配對原則，與待測細(xì)胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合（雜交），所形成的雜交體經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。
            基因組原位雜交（Genome in situ hybridization，GISH）：利用物種之間DNA同源性的差異，用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾?，在靶染色體上進(jìn)行原位雜交。
            熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）：在已有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性DNA分子原位雜交技術(shù)。它利用熒光標(biāo)記的核酸片段為探針，與染色體上或DNA顯微切片上的特異序列進(jìn)行雜交，通過熒光檢測系統(tǒng)（熒光顯微鏡）檢測信號DNA序列在染色體或DNA顯微切片上的目的DNA序列，進(jìn)而確定其雜交位點(diǎn)。FISH技術(shù)檢測時間短，檢測靈敏度高，無污染，已廣泛應(yīng)用于染色體的鑒定、基因定位和異常染色體檢測等領(lǐng)域。
            多彩色熒光原位雜交（Multicolor fluorescence in situ hybridization，mFISH）：在FISH技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，能同時檢測多個靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現(xiàn)多種色彩。
            
        		
            
        		
			
            
        
            
    
            
	 		 
	
            
		
            
			
            
				
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