目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>蛋白研究>>蛋白純化>> N30250-10mlNi TED Beads 6FF(鎳填料)
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
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Ni-TED beads 6FF
貨號：N30250
存儲條件：4-30℃
產(chǎn)品說明
LABLEAD的Ni親和層析介質(zhì)屬于一類金屬鰲合介質(zhì)，以高流速瓊脂糖為基質(zhì)，以IDA、NTA、TED為配基，并鰲合金屬離子Ni2+而形成的一種親和層析介質(zhì)，因整合方式不同，Ni2+離子結合力也存在細微差距，在對不同蛋白的純化過程中表現(xiàn)出不同的選擇性，廣泛用于His標簽蛋白的分離純化，其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。在含有EDTA及DTT的情況下直接進行目的蛋白純化，此介質(zhì)的清洗再生工作簡單，無需脫鎳直接進行NaOH清洗。
技術指標
名稱 | Ni-TED beads 6FF |
配基 | 三(甲基)乙二胺(TED) |
基質(zhì) | 6%高度交聯(lián)瓊脂糖 |
鰲含量 | 30~60umol/mL |
載量（每ml） | 30mg His標簽蛋白 |
平均粒徑 | 90um，分布45~165um |
推薦流速 | 150~600cm/h (根據(jù)柱子規(guī)格選擇合適流速) |
最大耐壓 | 0.3MPa |
pH穩(wěn)定性 | 3~12(工作) 2~14(清洗) |
化學穩(wěn)定性 | 0.01M鹽酸、0.01M氫氧化鈉(一周) ； 100mMEDTA、10mM DTT、1M氫氧化鈉、8M 尿素、6M鹽酸(24小時)； 100mMEDTA、0.5M咪(2小時)；30%異兩醇(20分鐘)。 |
應用 | 用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、及多膚的分離純化，尤其是zu氨酸標記蛋白質(zhì)的高效制備 |
操作說明
Ni-TED Chromrose 6FF可以在實驗室被填裝到中壓層析柱中，以擴大產(chǎn)量。將填料填裝到層析柱中，根據(jù)樣本量和填料載量選擇合適的層析柱和柱高。
1. 緩沖液準備
所用緩沖液需要采用高純水配制，使用前建議用0.45um濾膜過濾。
平衡緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，PH=7.4
漂洗緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，30mM咪唑，PH=7.4
洗脫緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，500mM咪唑，PH=7.4
2. 樣品準備
樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進行裂解、透析/超濾/G25進行緩沖液置換。
樣品過濾(平均粒徑<45um，用0.22um過濾；45um<平均粒徑<165um，用0.45um過濾；平均粒徑>165um，用0.8um過濾)。
3. 樣品純化
3.1 用3~5CV的純水沖洗出存儲緩沖液；
3.2 用5~10CV的平衡緩沖液平衡層析柱，至流出液電導與pH不變(與平衡液一致)；
3.3 利用泵或者上樣環(huán)上樣；
3.4 上樣完畢后用淋洗緩沖液沖洗10~15CV，至基線穩(wěn)定
3.5 用洗脫緩沖液采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫一般55CV，梯度洗脫可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積來分離不同結合強度的蛋白；
3.6 依次用3CV平衡緩沖液，5CV純水，2CV 20%乙醇沖洗層析柱后，置于2~8°C保存。
4. 在位清洗
當填料在使用過程中發(fā)現(xiàn)反壓過高或者填料上出現(xiàn)明顯污染，需要進行在位清洗操作。
4.1 去除強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類
方法一: 使用30%異丙醇清洗5~10CV，接觸時間為15~20min可以去除此類污染物，再用10CV的純水清洗；
方法二: 使用0.3M或0.5M NaOH溶液沖洗填料3CV，然后用1015CV的純水清洗。
4.2 去除離子作用結合的蛋白
使用1.5M NaCl溶液清洗10~15min，再用10CV純水清洗，清洗好的柱子用2CV的20%乙醇沖洗，置于2~8°C保存
圖 1Ni-TED beads 6FF 純化qing霉素酶發(fā)酵液電泳圖
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