谷胱甘肽瓊脂糖
MCE 國際站：Glutathione Agarose
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：2-8°C，2 年
簡介：Glutathione Agarose 以高度交聯的 4% 瓊脂糖凝膠為基質，可實現高產量，高純度的 GST 標記蛋白的純化。
概述：MCE Glutathione Agarose 是 GST 標簽蛋白純化介質，可以耐受一定濃度的還原劑、變性劑或耦合劑等，能夠簡單、快速、高特異性地對 GST 標簽蛋白進行純化。MCE Glutathione Agarose 以高度交聯的 4% 瓊脂糖凝膠為基質，通過化學方法共價結合還原型谷胱甘肽制作而成。MCE Glutathione Agarose 可以用于純化細菌、哺乳動物細胞、昆蟲及桿狀病毒等各表達系統(tǒng)表達的谷胱甘肽-S-轉移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽轉移酶的重組衍生物。本品儲存于 20% 乙醇中，每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前，需將介質充分重懸混勻后吸取。融合有 GST 標簽的重組蛋白可以與 Glutathione Agarose 親和介質特異結合，其他蛋白無法結合而被洗雜步驟清除。洗滌后，GST 標簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫，從而被分離純化。
描述：
MCE 谷胱甘肽瓊脂糖是一種 4% 高度交聯的瓊脂糖試劑，可有效純化各種規(guī)模的高水平過表達 GST 標記融合蛋白。MCE 谷胱甘肽瓊脂糖具有高蛋白結合能力和穩(wěn)定性，并且與多種化學品和 pH 值兼容，使其成為高效純化大腸桿菌、酵母、昆蟲和哺乳動物表達系統(tǒng)中表達的 GST 標記融合蛋白的理想選擇。
操作說明：4.1 Buffer 的準備4.2 樣品處理樣品在上樣前建議離心或用 0.22 μm 或者 0.45 μm 濾膜過濾，減少雜質，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。4.3 Glutathione Agarose 的裝填(1) 用去離子水沖洗柱底篩板，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水。(2) 將 Agarose 懸浮混勻，小心地將漿液連續(xù)地倒入柱管中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。(3) 打開柱底部出口，最初讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速，這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，得到很好的裝填效果。當柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上 3 倍柱體積的去離子水。標記柱床高度。(4) 關閉柱底部出口。4.4 樣品純化(1) 平衡：使用至少 5 倍柱體積的平衡/洗滌緩沖液平衡層析柱。(2) 上樣：利用泵或注射器上樣。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或使用濾膜 (0.22 μm 或 0.45 μm)過濾。(3) 洗雜：用平衡/洗滌緩沖液沖洗柱子，直到紫外吸收達到一個穩(wěn)定的基線 (一般至少 10-15 倍柱體積)，收集流出組分和洗雜部分。(4) 洗脫：用 5-10 倍柱體積的洗脫緩沖液洗脫柱子，收集洗脫液，即目的蛋白組分。(5) SDS-PAGE 檢測：將純化得到的樣品 (包括流出組分、洗雜部分和洗脫部分)以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果。4.5 填料清洗(1) 去除沉淀和一些變性物質：使用 2 倍柱體積的 6 M 鹽酸胍溶液清洗，然后立即用 5 倍柱體積的 PBS (pH 7.4)清洗。(2) 去除疏水性結合物質：使用 3-4 倍柱體積的 70% 乙醇或 2 倍柱體積的 1% Triton X-100 清洗，然后立即用 5 倍柱體積的 PBS (pH 7.4)清洗。
注意事項：(1) 請勿干燥或冷凍本產品，以免引起效價降低，降低純化效率。(2) 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。(3) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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