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人 CD34+ 細(xì)胞陰性分選試劑盒

MCE 國際站：Human CD34+ Cells Negative Selection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：4℃，2 年磁珠禁止凍結(jié)

簡介：MCE 人 CD34+ 細(xì)胞陰性分選試劑盒通過可以從人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞 (CBMC) 或外周血單個(gè)核細(xì)胞 (PBMC) 中快速富集 CD34+ 細(xì)胞。

概述：MCE 人 CD34+ 細(xì)胞陰性分選試劑盒通過可以從人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞 (CBMC) 或外周血單個(gè)核細(xì)胞 (PBMC) 中快速富集 CD34+ 細(xì)胞。原理為生物素 (biotin) 標(biāo)記的單克隆抗體對非目標(biāo)細(xì)胞（非 CD34+ 細(xì)胞）進(jìn)行標(biāo)記，再通過鏈霉親和素 (streptavidin) 標(biāo)記的磁珠對非目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行去除，從而實(shí)現(xiàn)人 CD34+ 細(xì)胞分選的目的。MCE 人 CD34+ 細(xì)胞陰性分選試劑盒操作簡單便攜，各成分對細(xì)胞均無毒性，可實(shí)現(xiàn)高純度細(xì)胞分離，分離的細(xì)胞可用于下游應(yīng)用，例如流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)、Western blot 分析、免疫沉淀 (IP)、報(bào)告基因檢測或 DNA/RNA 提取等。MCE 人 CD34+ 細(xì)胞陰性分選試劑盒具有如下優(yōu)點(diǎn)：簡單快速：30 min 即完成 CD34+ 細(xì)胞富集；無需分離柱：使用磁性分離器即可實(shí)現(xiàn)目的細(xì)胞的快速分離；富集效率高：一步富集可達(dá)到 10 倍濃縮，兩步富集達(dá)到 30 倍濃縮。

描述：

MCE 人 CD34⁺ 細(xì)胞負(fù)選試劑盒用于從人臍帶血單核細(xì)胞 (CBMC) 或人外周血單核細(xì)胞 (PBMC) 中分離 CD34⁺ 細(xì)胞。其原理是利用生物素標(biāo)記的單克隆抗體標(biāo)記非靶細(xì)胞（非 CD34⁺ 細(xì)胞），然后用鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠去除。該流程可有效分選人CD34⁺細(xì)胞。

MCE人CD34⁺細(xì)胞負(fù)選試劑盒的特點(diǎn)

高效：僅需30分鐘即可完成CD34⁺細(xì)胞的富集；

無需分離柱：使用磁分離器即可快速分離細(xì)胞，無需使用分離柱；

富集效率高：該流程一步富集可達(dá)到10倍濃度，兩步富集可達(dá)到30倍濃度。

操作說明：1. 制備人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞 (CBMC) 或人外周血單核細(xì)胞 (PBMC) 懸液：通過 Ficoll 密度梯度離心法從人臍帶血或人外周血中分離并收集單個(gè)核細(xì)胞，PBS 洗滌細(xì)胞并離心。將 CBMC 或 PBMC 重懸于分選緩沖液中，調(diào)整細(xì)胞密度為 1×108 cells/mL。2. 取 100 μL 細(xì)胞懸液 (1 × 107 個(gè)細(xì)胞）加入無菌流式管底部，再加入 2 μL Biotin-Antibody Mix，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：a. 細(xì)胞懸液直接加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。b. 根據(jù)所使用磁性分離器不同也可使用離心管進(jìn)行細(xì)胞分選。c. 如果分選更多細(xì)胞，可按比例增加 Biotin-Antibody Mix 的用量。3. 磁珠準(zhǔn)備：充分重懸 Streptavidin Magnetic Beads，取 20 μL 至 1.5 mL EP管中，加入 1 mL 分選緩沖液，10,000 × g 離心 1 min，棄上清。重復(fù)洗滌磁珠 1 - 2 次，加 20 μL分選緩沖液重懸磁珠。注：磁珠重懸分選緩沖液的用量與初始吸取磁珠體積需一致。4. 細(xì)胞-抗體孵育完成后，在流式管中加入 20 μL 清洗過的磁珠，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：如果分選更多細(xì)胞，可按比例增加磁珠用量。如分選 5 × 107個(gè)細(xì)胞，在 500 μL 細(xì)胞懸液中加入 10 μL Biotin-Antibody Mix 和 100 μL 磁珠。如果分選少于 1 × 107 個(gè)細(xì)胞，則將細(xì)胞懸液體積補(bǔ)至 100 μL，加入 2 μL Biotin-Antibody Mix和 20 μL 磁珠。5. 孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分選緩沖液，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。6. 將含有細(xì)胞的分選流式管置于磁性分離器上，磁性分離 5 min。7. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至干凈的無菌離心管中（轉(zhuǎn)移過程中流式管不可脫離磁性分離器），此細(xì)胞懸液中即包含富集的人 CD34+ 細(xì)胞，300 × g 離心 5 min。離心后棄上清，收集細(xì)胞。注：轉(zhuǎn)移過程中避免槍頭接觸磁珠，也可通過傾倒法收集細(xì)胞懸液。8. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要洗滌細(xì)胞，將細(xì)胞重懸于所需緩沖液或培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)分子生物學(xué)或細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：1. Biotin-Antibody Mix 使用和保存過程中均應(yīng)避免反復(fù)凍融、高速離心等操作。2. 建議選用低吸附移液器吸頭和離心管等耗材，避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗。3. 磁珠在使用和保存過程中應(yīng)避免高速離心、干燥或凍存；磁珠禁止長時(shí)間置于磁場，否則會(huì)引起磁珠聚團(tuán)結(jié)塊，降低其結(jié)合活性。4. 從磁珠保存管中吸取磁珠前應(yīng)充分振蕩混勻，操作過程中動(dòng)作應(yīng)輕柔，并避免產(chǎn)生氣泡。5. 本品需要與磁性分離器配套使用。6. 實(shí)驗(yàn)操作過程需輕柔，避免對細(xì)胞造成機(jī)械損傷。7. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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