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PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑

MCE 國際站：PolyFast Transfection Reagent

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20℃ 兩年避免反復凍融

簡介：MCE PolyFast Transfection Reagent 采用非脂質(zhì)體陽離子聚合物為主要成分，可高效地對 DNA、RNA 進行轉(zhuǎn)染。

概述：MCE PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑采用非脂質(zhì)體陽離子聚合物為主要成分，適用于 DNA、RNA 的轉(zhuǎn)染。其具體原理為外源 DNA、RNA 可以與轉(zhuǎn)染試劑形成穩(wěn)定復合物，通過胞吞作用進入細胞，隨后在胞質(zhì)中釋放。PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑對多種常見細胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率，對原代細胞和難轉(zhuǎn)染細胞也具有較好的效果，高效低毒、操作簡便、重復性好

描述：

MCE PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑由陽離子聚合物組成，可將核酸（DNA 或 RNA）引入真核細胞。在基于聚合物的轉(zhuǎn)染中，外源 DNA 與陽離子聚合物形成復合物，通過內(nèi)吞作用進入宿主細胞。PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑對許多細胞類型（包括一些難以轉(zhuǎn)染的細胞）具有高效、低毒的轉(zhuǎn)染效果。

操作說明：1. 準備待轉(zhuǎn)染細胞（以 6 孔板為例）1.1 提前一天接種細胞，至細胞密度達到 70-90% 進行細胞轉(zhuǎn)染。注：細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細胞應處于良好生長狀態(tài)，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。1.2 吸去原培養(yǎng)基，用 1× PBS 洗滌細胞 2-3 次，加入 900 μL 新鮮無血清培養(yǎng)基。2. 準備轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復合物2.1 對 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋，對于待轉(zhuǎn)染 6 孔板中的每孔細胞，取 50 μL 無血清培養(yǎng)基與 3 μL PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑混合，用槍輕輕吹打混勻，室溫反應 5 分鐘。2.2 參照表 1 對 DNA 進行稀釋，對于待轉(zhuǎn)染 6 孔板中的每孔細胞，取 50 μL 無血清培養(yǎng)基與 1 μg DNA 混合，用槍輕輕吹打混勻，室溫反應 5 分鐘。2.3 將上述稀釋好的 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑與 DNA 輕輕混勻，得到 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復合物，室溫孵育 15 分鐘。3. 加入 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復合物至細胞將上述 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復合物加入每孔細胞（復合物占每孔總體積約 1/10），輕輕混勻后于 37℃ 孵育 24-48 小時。必要時，可在轉(zhuǎn)染 6 小時后更換新鮮有血清培養(yǎng)基注：1） 通常情況下，DNA (μg) 和 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑 (μL) 的用量比例為 1:3。如有必要，可在 1:1-1:5 的范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。最佳轉(zhuǎn)染條件因不同的細胞類型和培養(yǎng)條件而有所區(qū)別，轉(zhuǎn)染前，可做預實驗摸索最佳轉(zhuǎn)染比例。2） RNA 轉(zhuǎn)染操作可參考 DNA 轉(zhuǎn)染方法進行。4. 分析轉(zhuǎn)染細胞轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng) 24-48 小時后，可根據(jù)實際情況用熒光檢測法、Western Blot、ELISA 等檢測轉(zhuǎn)染效果，或加入篩選藥物進行穩(wěn)定細胞株的篩選

注意事項：1. 轉(zhuǎn)染時，應選用高純度、無菌、無污染的 DNA/RNA。2. 細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細胞應處于良好生長狀態(tài)。3. 血清對 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復合物的形成有一定影響，建議用無血清培養(yǎng)基稀釋 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑和 DNA。4. 轉(zhuǎn)染過程中，抗生素的存在可能導致轉(zhuǎn)染效率降低及細胞毒性，不建議在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中添加抗生素。5. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，如細胞類型、細胞狀態(tài)及密度、DNA/RNA 質(zhì)量及濃度、PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑與 DNA/RNA 比例等，應根據(jù)具體實驗摸索最佳轉(zhuǎn)染條件。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：8-Gingerol  | Sulfamethoxazole  | Siponimod  | RS 09  | Sodium zirconium cyclosilicate  | Motixafortide  | (±)-N-3-Benzylnirvanol  | Phosphorylcholine  | SPDB  | Limonin

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