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PEI 轉(zhuǎn)染試劑

MCE 國際站：PEI Transfection Reagent

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20°C，12個月避免反復凍融

簡介：MCE PEI 轉(zhuǎn)染試劑是一款基于 25 kDa PEI 改造的 DNA 轉(zhuǎn)染試劑?？蓮V泛應用于多種細胞系的 DNA 轉(zhuǎn)染，包括 HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 HeLa 細胞等，也可應用于大規(guī)模重組蛋白表達和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域。

概述：PEI 是基因轉(zhuǎn)染中常用的高分子載體。PEI 是一種帶正電荷的陽離子聚合物，極易與帶負電的核酸分子結(jié)合形成復合物，該復合物再與細胞表面帶負電荷的蛋白多糖相互作用，通過胞吞作用進入細胞。MCE PEI Transfection Reagent 是一種基于分子量 25 kDa PEI 的 DNA 轉(zhuǎn)染試劑，通過引入可特異性結(jié)合 DNA 的功能基因?qū)?PEI 進行改性，顯著增強了 PEI 和 DNA 的結(jié)合能力，并且降低了細胞毒性。另外，通過功能性優(yōu)化顯著增強了 PEI 的細胞攝取、內(nèi)涵體逃逸等功能。MCE PEI Transfection Reagent 具有細胞毒性小、轉(zhuǎn)染效率高、穩(wěn)定性強及操作簡便等優(yōu)點，在多種細胞系中都能實現(xiàn)高效、低毒的 DNA 轉(zhuǎn)染，包括 HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 HeLa 等細胞。高性價比使其可廣泛用于大規(guī)模重組蛋白表達和病毒生產(chǎn)等工業(yè)領(lǐng)域。

描述：

聚乙烯亞胺是基因轉(zhuǎn)染中常用的聚合物載體，由陽離子聚合物組成，可將核酸導入真核細胞。在聚合物轉(zhuǎn)染中，外源DNA與陽離子聚合物形成復合物，通過內(nèi)吞作用進入宿主細胞。

MCE PEI轉(zhuǎn)染試劑是在25kDa PEI的基礎上設計而成，通過引入功能基因進行修飾，增強DNA的結(jié)合能力，降低細胞毒性，同時修飾后的PEI的細胞攝取和內(nèi)體逃逸功能明顯增強。

MCE PEI轉(zhuǎn)染試劑高效、低毒、穩(wěn)定性強，適用于HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa等多種細胞，甚至適用于一些難以轉(zhuǎn)染的細胞。還可應用于大規(guī)模重組蛋白表達和病毒生產(chǎn)。

操作說明：1. 準備待轉(zhuǎn)染細胞1.1 貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天，將胰酶消化后的細胞進行鋪板 (0.3-2 × 105 個細胞/孔)，至細胞密度達到 60-70% 進行細胞轉(zhuǎn)染1.2 懸浮細胞：轉(zhuǎn)染當天，配制轉(zhuǎn)染試劑-DNA 復合物之前，先進行細胞鋪板，每 500 μL 生長培養(yǎng)基中加入 2-5 × 105 個細胞。注：為提高轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 >90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。2. 準備轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物2.1 取 1 μg 質(zhì)粒 DNA 至 1.5 mL EP 管中，加入 50 μL 無血清培養(yǎng)基（與培養(yǎng)體系一致，無血清無雙抗），輕柔混勻。2.2 取 2.5 μL PEI Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑加入到另一個 1.5 mL EP 管中，加入 50 μL 無血清培養(yǎng)基（與培養(yǎng)體系一致，無血清無雙抗）輕柔混勻。注：a) 通常情況下，DNA (μg) 和 PEI Transfection Reagent (μL) 的用量比例為 1:2.5。為提高轉(zhuǎn)染效果，可在 1:1-1:5 范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。b) 最佳轉(zhuǎn)染條件因細胞類型和培養(yǎng)條件不同而有所區(qū)別，可做預實驗摸索最佳轉(zhuǎn)染比例。2.3 將 2.1 轉(zhuǎn)移至 2.2 中，輕柔混勻（總體積為 100 μL），室溫孵育 30 min，即形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物。注：該轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物在室溫下 4 h 內(nèi)仍保持穩(wěn)定。注： 細胞轉(zhuǎn)染時，可根據(jù)實際情況參考上表進行等倍放大。3. 細胞轉(zhuǎn)染將上述轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物 (100 μL) 加入每孔細胞，輕柔混勻，將細胞放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。4. 分析轉(zhuǎn)染細胞轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng) 36-48 h 后，可使用熒光檢測法、Western Blot、ELISA、RT-PCR、流式細胞術(shù)、報告基因等檢測轉(zhuǎn)染效果，或加入篩選藥物進行穩(wěn)定細胞株的篩選。

注意事項：1. 轉(zhuǎn)染時，建議選用高純度、無菌、無污染、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)的質(zhì)粒 DNA。質(zhì)粒中內(nèi)毒素會導致轉(zhuǎn)染效率顯著下降，推薦配合選用 MCE 質(zhì)粒大量抽提試劑盒 ，提取質(zhì)粒純度更高，柱上去除內(nèi)毒素，操作簡便。2. 細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，為提高轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 >90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。3. 轉(zhuǎn)染過程中，抗生素的存在可能導致轉(zhuǎn)染效率降低及細胞毒性，不建議在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中添加抗生素。4. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，如細胞類型、細胞狀態(tài)及密度、核酸質(zhì)量及濃度、轉(zhuǎn)染試劑與核酸比例等，建議先做預實驗摸索最佳轉(zhuǎn)染條件。5. 血清會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生一定程度的干擾，為提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染過程中，建議使用無血清培養(yǎng)基。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Guanosine  | Narirutin  | Chrysophanol  | Ulinastatin  | Zaprinast  | Pipecolic acid  | ML-9  | Tiotropium (Bromide)  | Spesolimab  | 5-Aminolevulinic acid-13C-1 (hydrochloride)

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