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Kromasil液相色譜柱155|大青葉配方顆粒特征圖譜的測定 高效液相色譜法
案例說明
大青葉配方顆粒試樣經(jīng)水超聲提取后，采用梯度洗脫，用紫外檢測器檢測。大青葉配方顆粒應(yīng)呈現(xiàn)11個(gè)特征峰。
分析條件
色譜柱：Kromasil 100-5-C18(w)，4.6x250mm （訂貨號：M05WLA25）
流動(dòng)相：（A）甲醇 （B）0.1%磷酸溶液
按下表進(jìn)行梯度洗脫：
時(shí)間/min | 流動(dòng)相A（%） | 流動(dòng)相B（%） |
0 | 0 | 100 |
20 | 3 | 97 |
40 | 20 | 80 |
80 | 45 | 55 |
100 | 70 | 30 |
流速：1.0mL/min
進(jìn)樣量：10μL
柱溫：30℃
波長：260nm
分析圖譜
依據(jù)上述色譜條件，分別將參照物溶液與供試品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行測定，
參照物溶液的色譜圖如圖1和圖2所示，色譜圖積分結(jié)果見表1。
表1參照物溶液色譜圖積分結(jié)果
目標(biāo)物 | 保留時(shí)間 | 峰面積 | 峰高 | 理論塔板數(shù) | 分離度 | 對稱/拖尾因子 |
尿苷 | 13.683 | 1325.626 | 88.005 | 20010 | - | 1.04 |
腺苷 | 17.983 | 1978.065 | 77.867 | 14068 | 8.66 | 1.57 |
鳥苷 | 24.833 | 1589.416 | 71.842 | 30912 | 11.70 | 1.09 |
紫丁香苷 | 51.983 | 1822.787 | 109.000 | 226580 | - | 0.96 |
由表1中數(shù)據(jù)可知，紫丁香苷峰的理論塔板數(shù)為226580，滿足《大青葉配方顆?！分幸?guī)定的不低于5000的要求。
供試品溶液的色譜圖如圖3所示，色譜圖積分結(jié)果見表2，特征峰相對保留時(shí)間結(jié)果見表3
表2 供試品溶液色譜圖積分結(jié)果
目標(biāo)物 | 保留時(shí)間 | 峰面積 | 峰高 | 理論塔板數(shù) | 分離度 | 對稱/拖尾因子 |
1:尿苷 | 13.758 | 3140.146 | 203.821 | 19981 | - | 0.98 |
2:腺苷 | 18.108 | 938.206 | 40.028 | 14160 | 8.72 | 1.48 |
3:鳥苷 | 24.933 | 1452.136 | 56.695 | 26634 | 11.19 | 1.39 |
4 | 31.950 | 662.504 | 35.505 | 64873 | 12.61 | 1.22 |
5 | 38.242 | 625.214 | 33.416 | 166222 | 14.35 | 1.57 |
6（S）:紫丁香苷 | 52.033 | 720.704 | 41.351 | 242837 | 34.59 | 1.18 |
7 | 56.233 | 235.898 | 12.782 | 209504 | 9.19 | 1.03 |
8 | 66.383 | 621.233 | 30.348 | 236654 | 19.58 | 0.88 |
9:異葒草苷 | 69.067 | 486.083 | 20.501 | 305205 | 5.13 | 1.78 |
10:異牡荊苷 | 78.400 | 1677.888 | 91.957 | 417521 | 18.95 | 1.00 |
11:異金雀花素 | 80.108 | 615.450 | 32.211 | 407043 | 3.46 | 0.97 |
表3 特征峰相對保留時(shí)間結(jié)果表
目標(biāo)物 | 保留時(shí)間 | 相對保留時(shí)間測定值 | 相對保留時(shí)間規(guī)定值 | 偏差 |
4 | 31.950 | 0.614 | 0.567 | 8.30 |
5 | 38.242 | 0.735 | 0.686 | 7.14 |
6（S）:紫丁香苷 | 52.033 | - | - | - |
7 | 56.233 | 1.081 | 1.159 | -6.75 |
8 | 66.383 | 1.276 | 1.308 | -2.46 |
9:異葒草苷 | 69.067 | 1.327 | 1.352 | -1.82 |
10:異牡荊苷 | 78.400 | 1.507 | 1.465 | 2.85 |
11:異金雀花素 | 80.108 | 1.540 | 1.511 | 1.89 |
由表2和表3中數(shù)據(jù)可知，大青葉配方顆粒供試品溶液的特征峰個(gè)數(shù)為11個(gè)，與《大青葉配方顆?！分幸?guī)定的特征峰個(gè)數(shù)一致；峰1-3，峰6的保留時(shí)間與參照物溶液的保留時(shí)間相對應(yīng)，峰4、峰5、峰7、峰8、峰9、峰10和峰11與紫丁香苷（S峰）的相對保留時(shí)間分別為0.614、0.735、1.081、1.276、1.327、1.507和 1.540，均在規(guī)定值的±10%范圍之內(nèi)。
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