抗體篩選是抗體藥物開發(fā)中的關(guān)鍵一環(huán)。目前代表性的抗體篩選技術(shù)包括雜交瘤技術(shù)、轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、單B細(xì)胞篩選技術(shù)等。
利用合成抗體庫以及從人或動物中分離單個B細(xì)胞克隆的抗體發(fā)現(xiàn)流程，在生成了候選抗體庫之后，候選抗體的單獨(dú)表達(dá)和評估卻往往依賴于勞動密集型程序（例如基于質(zhì)粒的克隆、轉(zhuǎn)染、基于細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白質(zhì)純化）。篩選過程需要數(shù)周至數(shù)月的時間，嚴(yán)重制約抗體篩選的速度和通量。
代表性抗體篩選技術(shù)
無細(xì)胞蛋白表達(dá)（CFPS）為候選抗體單獨(dú)表達(dá)提供了一種新方式。該技術(shù)是一種無細(xì)胞膜限制、高開放性、高可控性的體外蛋白質(zhì)生物合成技術(shù)。
無細(xì)胞表達(dá)抗體示意圖
在抗體篩選方面，CFPS相比于細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)具有顯著優(yōu)勢：
①無需耗時的基因克隆、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞培養(yǎng)流程，從線性DNA片段到候選抗體分子僅需數(shù)小時；
②可高通量、自動化合成抗體，可適配高通量移液工作站進(jìn)行高通量、自動化抗體表達(dá)，更節(jié)省人力成本。
基于細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與基于CFPS的抗體篩選對比
近日，珀羅汀生物攜手玄刃科技成功建立高通量無細(xì)胞蛋白表達(dá)工作站，日篩抗體三千個，自動合成無人工！抗體篩選告別以周甚至月為周期，進(jìn)入“天選"模式！
珀羅汀無細(xì)胞抗體篩選，允許以線性化DNA片段作為模板，數(shù)小時內(nèi)表達(dá)候選抗體，產(chǎn)物可直接進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，無需純化。另外，珀羅汀生物無細(xì)胞技術(shù)允許二硫鍵生成，既可表達(dá)VHH、scFv抗體分子片段，也可表達(dá)Fab、全長抗體，無抗體種類限制。
案例：利用CFPS從單B細(xì)胞中快速篩選單克隆抗體
該研究通過單B細(xì)胞建立抗體庫，通過CFPS表達(dá)并評估m(xù)Abs，在2天內(nèi)完成了抗原特異性mAbs的篩選。該方案包括從免疫兔的外周血中收集B細(xì)胞、通過抗原包被的磁珠和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)染色選擇B細(xì)胞、基于單細(xì)胞的PCR、在CFPS中生產(chǎn)mAb以及CFPS產(chǎn)物直接進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
單B細(xì)胞+CFPS抗體篩選方案
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