ELISA素來以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用。而它作為經(jīng)典的免疫檢測方法，雖然看似平常但是要真正將該實驗做好并不容易，酶標板的讀值總是會不盡如人意，可見實操中的各個環(huán)節(jié)對該實驗的檢測效果影響較大，如不注意，就會產(chǎn)生一些糟心的實驗結果。跟小源一起來總結一下ELISA空白背景高的常見原因和處理方法吧!
常見原因有以下這些：
1）洗板不干凈
解決方法：
①充分洗滌：如果洗板的時間不夠，會導致抗體殘留，陰性對照會顯色，嘗試延長洗板時間，增加洗板頻率，在洗液中添加表面活性劑Tween-20。
在洗板時要保證每步都洗滌完，充分拍板直至孔內(nèi)沒有明顯的殘留液體。
②避免交叉污染：棄去洗液和孵育的抗體時避免交叉污染，移液槍頭盡可能一次性使用，拍板的濾紙不要反復使用。
2）顯色液變質(zhì)或者試劑過期
解決方法：檢查試劑盒有效期，或使用新的試劑盒并按照說明書要求保存試劑盒。每次用剩下的顯色液最好不要回收，或者只回收洗凈的容器裝的顯色液。
3）試劑稀釋有誤，檢測抗體/酶結合物工作液濃度過高
解決方法：按照說明書推薦的稀釋倍數(shù)稀釋抗體。
4）試劑盒組分未平衡
解決方法：試劑盒每個組分都需要平衡至室溫后進行實驗。
5）混用其他試劑盒試劑
解決方法：保證使用試劑盒內(nèi)完整的一套試劑進行實驗，不同品牌及不同批次間的試劑可能存在不匹配現(xiàn)象，不同批號的試劑不要混用。
6）蒸餾水受酶等污染
解決方法：使用新鮮蒸餾水。
7）培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應時間過長
解決方法：孵育時間過長、溫度過高可能會導致非特異性結合增加，從而造成本底增高。檢查恒溫箱，確保孵育溫度穩(wěn)定在37℃，按照說明書的反應時間進行孵育。
8）酶標板底部有污漬
解決方法：在加完終止液之后，檢測之前，用75%乙醇浸潤的脫脂棉球擦拭酶標板底部，確認沒有污漬之后再檢測。
9）洗液被污染
解決方法：洗液現(xiàn)配現(xiàn)用，長期放置會析出，也可能會污染，導致背景偏高。
10）包被的抗原被污染
解決辦法：仔細回想操作過程，換新的抗原包被。
11）封閉液、封閉時間、封閉液的濃度
解決辦法：封閉液（BSA）可能會與抗體產(chǎn)生交叉反應。封閉液的濃度偏低、封閉時間過短導致封閉不che底，抗體與酶標板結合，可能也會導致背景偏高，因此可以適當調(diào)整封閉液的濃度和時間以降低背景。
12）抗體質(zhì)量差或選擇的抗體不合適
解決辦法：抗體質(zhì)量不高，特異性不好可能會與封閉液（BSA）產(chǎn)生交叉反應，可以用0.8%明膠（明膠不含有血清成分）代替。
若選擇多克隆抗體孵育，可能會與酶標單抗產(chǎn)生交叉反應，導致背景增加，最好選用與酶標單抗同種屬的多克隆抗體。
13）酶標儀設置參數(shù)有誤
解決辦法：檢查酶標儀設置的波長，不同波長下樣品的吸光光度值也會有很大的差別，按照說明書要求設置參數(shù)。
本期內(nèi)容：ELISA空白背景高的常見原因和處理方法
下期內(nèi)容：酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA實驗類型有哪些？
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