熒光定量PCR檢測儀是一種通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對PCR產(chǎn)物進行標(biāo)記跟蹤，并實時監(jiān)測反應(yīng)過程的儀器。
熒光定量PCR檢測儀基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)原理，利用熒光信號來監(jiān)測DNA片段數(shù)量的變化。在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，當(dāng)PCR擴增進行時，熒光信號會隨之增強。這些信號經(jīng)過光學(xué)系統(tǒng)收集后，被轉(zhuǎn)化為電信號并進行數(shù)據(jù)處理，最終得出目標(biāo)基因的拷貝數(shù)或表達量。
儀器具有廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域，包括但不限于以下幾個方面：
1.基礎(chǔ)科研：在基因表達分析和豐度檢測中，熒光定量PCR技術(shù)可以準(zhǔn)確獲取細(xì)胞、組織或樣品中特定基因的表達量及其在生物體內(nèi)的分布情況，有助于理解基因功能、揭示生物體生長發(fā)育規(guī)律以及探索疾病發(fā)生機制。
2.醫(yī)學(xué)檢測：作為病原體檢測和遺傳病篩查的重要手段，熒光定量PCR技術(shù)可以檢測血液、體液或組織樣本中的病原體DNA或RNA，快速準(zhǔn)確地診斷出感染性疾病(如乙肝、丙肝、艾滋病等)和遺傳性疾病。
3.食品安全：通過檢測食品中的致病菌(如沙門氏菌、大腸桿菌等)和轉(zhuǎn)基因成分(如轉(zhuǎn)基因作物中的外源基因)，熒光定量PCR技術(shù)能夠確保食品的安全性和合規(guī)性。
4.農(nóng)業(yè)研究：在農(nóng)業(yè)研究領(lǐng)域，該技術(shù)可用于檢測植物基因組中的突變和表達量變化，評估作物的生長發(fā)育情況和適應(yīng)性，為作物遺傳改良和品種鑒定提供科學(xué)依據(jù)。
使用的注意事項有：
1.樣品準(zhǔn)備：確保樣品的質(zhì)量和純度，避免有雜質(zhì)或受到污染。同時，根據(jù)實驗需要適當(dāng)稀釋樣品，以避免過高的濃度對熒光定量PCR反應(yīng)的影響。
2.引物設(shè)計：合理設(shè)計引物序列，確保引物的特異性和互補性，避免引物間的二聚體或非特異性擴增。
3.反應(yīng)體系準(zhǔn)備：準(zhǔn)確配制反應(yīng)體系中的各組分，包括引物、模板DNA、熒光標(biāo)記的探針和PCR反應(yīng)緩沖液等。
4.儀器操作：在操作過程中，注意保持環(huán)境的潔凈和儀器的穩(wěn)定性。同時，根據(jù)實驗需要設(shè)置合適的PCR儀參數(shù)，如溫度、時間和周期數(shù)等。
5.結(jié)果分析：結(jié)合相應(yīng)的軟件對檢測結(jié)果進行定性和定量分析，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
