豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒
英文名：Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 豬瘟是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的豬的一種高度接觸性、出血性和致死性傳染病，其特征為高熱稽留和微血管壁變性而引起的廣泛出血、壞死、梗塞等，慢性以纖維素壞死性腸炎為特征。
本試劑用于檢測(cè)豬血清中豬瘟病毒抗體，可用于豬瘟病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。
【試劑盒組成】
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
1 | 酶標(biāo)記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
2 | 樣品稀釋液 | 25ml×1(黃蓋) | 50ml×1(黃蓋) | 125ml×1(透明) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(透明) |
4 | 底物顯色液 | 10ml×1(黑蓋) | 10ml×2(棕蓋) | 25ml×2(黑蓋) |
5 | 終止液 | 5ml×1(黃蓋) | 10ml×1(黃蓋) | 25ml×1(黃蓋) |
6 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
7 | 陰性對(duì)照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
8 | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
9 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
10 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
11 | 說(shuō)明書 | 1 | 1 | 1 |
12 | 稀釋板 | 1 | 2 | 5 |
【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血，待血液凝固后，以4000r/min 離心10分鐘，收集血清；或待血液凝固后自然析出血清，再收集血清。血清應(yīng)清亮，無(wú)溶血。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按1:1稀釋（如100μl血清加入100μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
溫馨提示：先使用血清稀釋板稀釋完所有的待檢血清、再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到抗原包被板上，使反應(yīng)時(shí)間一致。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存，每孔加入工作洗滌液 300μl，無(wú)需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗滌2次，最后一次拍干。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)2小時(shí)。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加300μl工作洗滌液，無(wú)需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔加入底物顯色液100μl，置室溫( 20～25℃)避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加入終止液50μl，混勻，10分鐘內(nèi)于630nm測(cè)定各孔吸光值。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)≥0.6，陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)≤0.5。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.PI（阻斷率）=（1- 陰性對(duì)照平均A值）×100%。
2.PI≥40%為陽(yáng)性；PI<40%為陰性。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬血清、血漿中病毒抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.若試劑盒陰陽(yáng)性對(duì)照、酶標(biāo)記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬于正?，F(xiàn)象。
4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以溶解。
6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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