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            探索小鼠外周血血小板分離液試劑盒起源

            閱讀:193      發(fā)布時(shí)間:2025-2-28
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            小鼠外周血血小板分離液試劑盒


             

            規(guī)格200 mL/kit

            保存:本產(chǎn)品對(duì)光敏感,應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存,保質(zhì)期 2 年。無(wú)菌開(kāi)封后,保存于室溫。

             

            組成:



            小鼠外周血血小板分離液全血及組織稀釋液

            細(xì)胞洗滌液

            200mL

            200mL

            200mL

            操作步驟:



            1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

            2. 在離心管中加入至少5mL的分離液當(dāng)血液的體積大于等于3mL,加入2倍體積分離液,但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二,否則會(huì)影響分離效果)。

            3. 將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后將血液小心的平鋪于分離液上,因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?,將形成明顯的分層界面。如果樣品較多,加樣的時(shí)間較長(zhǎng),在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?,F(xiàn)象)

            4. 室溫,水平轉(zhuǎn)子200-250g ,離心15min血液的體積越大所需的離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),最佳的分離條件需摸索。

            5. 離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層:最上層為富含血小板的血漿層;第三層為分離液層;分離液與血漿層之間是白色細(xì)胞層;第四層為紅細(xì)胞層。


            6. 小心的吸取富含血小板的血漿層到15mL潔凈的離心管中,加入10mLPBS或細(xì)胞洗滌液如果需要得到富含血小板的血漿, 可直接吸取,不再清洗)。500g,離心20min

            7. 棄上清,5mLPBS或細(xì)胞洗滌液重懸血小板,500g,離心

            20min。

            8. 棄上清,重懸備用。

            注意事項(xiàng):

            A. 開(kāi)封前顛倒混勻,本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品,為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間,請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封,避免微生物污染。。

            B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫(18~25℃),如室內(nèi)溫度較低,可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,分離效果差。

            C. 吸取過(guò)多的血小板血漿層下層溶液會(huì)導(dǎo)致交界處白細(xì)胞混雜。

            D. 血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血2 h以內(nèi)),避免冷凍和冷藏。


             

             

             分離示意圖

            QQ圖片20250228082914.png



             

             

             

            富含血小板的血漿層細(xì)胞層

            分離液層

             

            紅細(xì)胞層


            E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞,不可使用含CaMg離子的緩沖液及培養(yǎng)液,降低細(xì)胞得率及純度。

            F. 部分塑料制品(如聚苯乙烯因其帶有的靜電作用,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁,影響分離效果。

            G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會(huì)影響分離效果,可以對(duì)血液稀釋或者是調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間, 摸索最佳的分離條件。

            H. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。

            參考文獻(xiàn):

            1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.

             

            2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.

            3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.

             

            4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.

            5. Recalde HR. A simple method of obtaining monocytes in suspension. J Immunol Methods. 1984 Apr 13;69(1):71-7.

             

            6. B?yumA ,L?vhaugD ,TreslandL.Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of gradient mediu m density and osmolality. Scand J Immunol. 1991 Dec; 34(6):697-712.

            7. Harris R, Ukaejiofo EO. Tissue typing using a routine one-step lymphocyte separation procedure. Br J Haematol. 1970 Feb; 18(2):229-35.

             


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