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Extreme Thermostable Rnase HII試劑是一種來源于耐熱的菌株的內(nèi)源性 核酸內(nèi)切酶，它識(shí)別RNA/DNA 雜交鏈并切割RNA鏈，其對單鏈RNA切割活性極低，且對dsDNA、ssDNA無 切割活性。該RNase HII 酶在DNA/RNA duplex的單核糖核苷酸殘基處從5’端進(jìn)行切割，切割后 產(chǎn)生一個(gè)5′ 端磷酸基團(tuán)和一個(gè) 3′ 端羥基。該RNase HII 酶在 70- 75°C 具有最佳活性，在 50°C 到 75°C 間均具有活性，但其在室溫下活性非常低。該酶 極度耐熱，在95°C加熱30min后仍保留全部活性，因此其與大多數(shù)的PCR緩沖體系兼容，可用于 RNase H2依賴性PCR（rhPCR）等實(shí)驗(yàn)。與RNase HI 相比，RNase HII可識(shí)別單個(gè)核糖核苷酸并進(jìn)行切 割，而RNase HI識(shí)別四個(gè)連續(xù)核糖核苷酸的2'-OH；另外，RNase HII可降解岡崎片段，而Rnase HI沒有這個(gè)活性。

單位定義

一個(gè)單位是指在 60°C 下，15分鐘切割 1nmol 含有單個(gè)RNA的嵌合DNA/RNA雜交雙鏈體底物所需的酶量。

儲(chǔ)存

置于-20°C，可保存2年。

Extreme Thermostable Rnase HII試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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