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用電熱恒溫培養(yǎng)箱做小鼠大腦皮層神經(jīng)元原代細胞培養(yǎng)
電熱恒溫培養(yǎng)箱常用于各種細菌細胞培養(yǎng)實驗，那小鼠大腦皮層神經(jīng)元原代細胞是如何培養(yǎng)的的呢？由小喆帶大家了解一下。
小鼠大腦皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)步驟：
1、于無菌條件下切取鼠頭并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠腦；
2、預(yù)冷解剖液中分離去除軟膜、血管、取大腦皮質(zhì)漂洗，用眼科剪將皮質(zhì)反復(fù)剪切成碎塊；
3、移入培養(yǎng)皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，電熱恒溫培養(yǎng)箱中37℃消化30min；
4、將皮層組織碎塊移入離心管，棄去剩余消化液，用接種液洗3次，每次洗滌后使組織塊充分沉降到試管底，棄去上清液；
5、最后再用接種液1ml混懸，反復(fù)吹打（巴氏吸管）混懸液中組織塊，力度適中，至渾濁后將上清液移入培養(yǎng)瓶待用；
6、加入1ml接種液后再次吹打，如此反復(fù)3-4次，組織塊逐漸消化后，棄去最終殘塊；
7、收集含單細胞懸液的上清液約4-5ml于培養(yǎng)瓶中，以接種液重新懸浮細胞，細胞記數(shù)；接種1x107個細胞于6孔培養(yǎng)板中；
8、培養(yǎng)24h至細胞貼壁后，換全培養(yǎng)液（DMEM/F12+2%B27，engreen）培養(yǎng)3d，觀察神經(jīng)元生長狀況；
9、換用阿糖胞苷培養(yǎng)液(終濃度2.5ug/ml，換半液)培養(yǎng)3d以抑制神經(jīng)膠質(zhì)細胞及雜細胞生長，獲得單純培養(yǎng)的原代神經(jīng)細胞；
10、每隔3d換全培養(yǎng)液1次，每次換半液。
以上是小喆簡單的見解，關(guān)注上海喆圖公眾號，了解更多小知識。