傳統(tǒng)分離膜蛋白的方法繁瑣而耗時(shí)，并且都需要梯度分離和昂貴的超高速離心儀器。而Thermo Scientific Mem-PER真核細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒是一種快速、簡單、便宜的膜蛋白分離方法。使用該試劑盒的三種試劑可以從培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物、酵母細(xì)胞以及軟或硬的哺乳動(dòng)物組織中抽提并選擇性地富集膜蛋白。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
- 的降低了親脂（膜）蛋白組份中參雜的親水性蛋白的交叉污染(一般< 10%)。
- 適用于多種培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母細(xì)胞以及哺乳動(dòng)物組織。
- 與SDS-PAGE、蛋白免疫印跡, 蛋白定量分析等下游應(yīng)用兼容(詳見相關(guān)產(chǎn)品)。
- 提供簡單完整的方法，使用該方法可以在大約1小時(shí)以內(nèi)從哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織以及酵母細(xì)胞中分離膜蛋白。
- 僅需臺(tái)式微量離心機(jī)和離心管。
使用Thermo Scientific Mem-PER 真核細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒來溶解和分離酵母膜內(nèi)蛋白(釀酒酵母菌株EGY-194)。向濕重大10-15mg的細(xì)胞沉淀中加入80μlMem-PER 試劑 A和100-150mg、尺寸為405-600μm的酸洗玻璃珠并在室溫渦旋10分鐘來破裂酵母細(xì)胞的細(xì)胞壁。短暫離心收集玻璃珠，然后將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中并將離心管置于冰上。用720 μl Mem-PER試劑B和C洗滌收集的玻璃珠然后將洗滌液加入到細(xì)胞裂解液中并在冰上孵育30分鐘。樣本進(jìn)行4-12%Bis-Tris凝膠電泳。
分別對從大鼠肝（圖A）和大鼠心（圖B）制備的膜蛋白進(jìn)行蛋白免疫印跡。利用蛋白免疫印跡對通過Mem-PER 試劑制備的疏水（膜蛋白）成分和相應(yīng)的親水成分進(jìn)行分析，分別對VDAC (31 kDa, Affinity BioRegeants),cellugyrin (29 kDa, BDTransduction Laboratories)及flotillin-1 (48 kDa, BD Transduction Laboratories)進(jìn)行免疫印跡分析。M = 膜蛋白組份，H =親水組份。
對Thermo Scientific Mem-PER 試劑溶解的蛋白進(jìn)行分級。使用Mem-PER真核細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒對三種細(xì)胞系的蛋白進(jìn)行溶解和抽提。每組疏水（膜蛋白）和親水組分均通過標(biāo)準(zhǔn)操作獲得，利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析四種細(xì)胞定位已知的蛋白。利用SDS-PAGE/蛋白質(zhì)免疫印記分析對COX4進(jìn)行分析之前，使用SDS-PAGE樣品制備試劑盒去除膜組分中的去垢劑。所有碎片組分中檢測到的蛋白污染量極低。縮寫: AchE = 乙酰酯酶, COX4 =細(xì)胞色素氧化酶4亞基,hsp90 =熱休克蛋白90, M = 可溶性膜蛋白組分，H = 親水性蛋白組分。
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