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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學(xué)>>質(zhì)粒提取>> NAE02質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號NAE02
品 牌NobleRyder/諾博萊德
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地北京市
更新時間:2025-03-13 16:49:37瀏覽次數(shù):38次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T / 100T |
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貨號 | NAE02 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
主要用途 | 可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗 |
質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取
NobleRyder D9988 質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit
產(chǎn)品貨號:D9988
產(chǎn)品名稱:質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit
英文名稱:Plasmid Extraction Mini Kit
產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T
產(chǎn)品簡介:
儲存條件:酶附件-20℃,其它試劑RT,有效期1年。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
NobleRyderD9988 質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。 使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗。
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入),混勻,置于 2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。
操作步驟(僅供參考):
1. 取 1-5mL 細(xì)菌培養(yǎng)物,12000rpm 離心 1min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。
2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μL溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNase A),使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意:如果菌塊未che底混勻,會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。
3. 向離心管中加入250μL溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細(xì)菌基因組 DNA,此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠,作用時間不要超過 5min,以免質(zhì)粒受到破壞。
4. 向離心管中加入350μL溶液Ⅲ,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,12000rpm離心10min,用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。
5. 取上一步上清,加入0.4倍體積無水乙醇,充分混勻。(體積過多可分兩次混合,然后上柱)。
6. 將上一步混合液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中(如果為了提高得率,可將收集管中的液體加入吸附柱再次吸附一次)。
7. 向吸附柱中加入750μL漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8. 向吸附柱中加入700μL漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
9. 12000rpm 離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗,如酶切、PCR等。
10. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。
11. 為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心1min。
注意事項:
1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子。
2. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μL,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率,DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。
3. 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,使用5-10mL過夜培養(yǎng)物,同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當(dāng)?shù)难娱L時間,以增加提取效率。
4. DNA 濃度及純度檢測:得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。得到的 DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/mL雙鏈DNA、40ug/mL單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。
質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取
產(chǎn)品訂購信息
D9988 質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit 50T
D9988 質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit 100T
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