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參 考 價(jià) | 面議 |
產(chǎn)品型號(hào)D0188
品 牌NobleRyder/諾博萊德
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地北京市
更新時(shí)間:2025-03-13 17:08:28瀏覽次數(shù):18次
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T / 100T |
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貨號(hào) | D0188 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
真菌基因組DNA提取試劑he 質(zhì)粒提取
NobleRyderD0188 真菌基因組DNA提取試劑he Fungi Genomic DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào):D0188
產(chǎn)品名稱:真菌基因組DNA提取試劑he Fungi Genomic DNA Extraction Kit
英文名稱:Fungi Genomic DNA Extraction Kit
產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
儲(chǔ)存條件:酶附件-20℃,其它試劑RT,復(fù)檢期1年
NobleRyderD0188 真菌基因組DNA提取試劑he真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物,種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬(wàn)以上,種超過(guò)10萬(wàn)個(gè)。真菌通常又分為三類(lèi),即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。對(duì)于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,而對(duì)于大型真菌,可直接用液氮研磨。經(jīng)過(guò)前期處理的菌液,用硅質(zhì)膜吸附,即可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
本試劑盒適用于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,經(jīng)過(guò)前期處理的菌液,用硅質(zhì)膜吸附,即可得到高純度的基因組。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
操作步驟(僅供參考):
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽(每瓶需要單獨(dú)添加45mL無(wú)水乙醇)。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、樣品處理:
1)對(duì)于酵母菌,取1-2mL培養(yǎng)好的菌液,離心收集,棄上清。加入200μL溶液A,加入2μLRNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5-10min。
2)霉菌(孢子也可相同處理):取50-100mg菌絲,加200μL溶液A,用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,加入2μL RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約30min。
3)大型真菌(建議):稱取100-200mg樣品,倒入適量的液氮,立即研磨重復(fù)3次,使樣品研成粉末,加400μL的CTAB裂解液,加入2μL RNase A,再加入100mg 玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5min,后續(xù)再采用本試劑盒繼續(xù)提取。
2、 加入20μL的蛋白酶K,充分混勻,55℃水浴消化30min,消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。 12000rpm離心2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。
3、在上清中加入200μL溶液B,充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀,可放55℃水浴5min,沉淀即會(huì)消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說(shuō)明樣品消化不che底,可能導(dǎo)致提取的 DNA量少及不純,還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子,請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間。
4、再加入200μL無(wú)水乙醇,充分混勻,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響DNA的提取,將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置2min。
5、12000rpm 離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入600μL漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。
9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心2min,即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。
注意事項(xiàng):
1. 由于真菌種類(lèi)萬(wàn)千,對(duì)于一些特別難處理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振蕩,蛋白酶K處理,一般都可以得到一定量的基因組DNA,如電泳檢測(cè)很弱,一般PCR都會(huì)有較好結(jié)果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,可在55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少,可加長(zhǎng)玻璃珠處理時(shí)間,如果提取DNA成彌散短條帶,可減少玻璃珠處理時(shí)間。
4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于50μL,體積過(guò)小會(huì)影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率;DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。
5. DNA 濃度及純度檢測(cè):得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)?;厥盏玫降?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/mL雙鏈DNA、40 μg/mL 單鏈 DNA
OD260/OD280比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。
真菌基因組DNA提取試劑he 質(zhì)粒提取
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D0188 真菌基因組DNA提取試劑he Fungi Genomic DNA Extraction Kit 50T/100T
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