諾博萊德 真菌蛋白提取試劑盒

NobleRyder P5085 真菌蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

產(chǎn)品貨號(hào)：P5085

產(chǎn)品名稱：真菌蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

真菌蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：真菌蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5085 真菌蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

真菌蛋白提取試劑盒（蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)適用）適用于從各種絲狀真菌中提取總蛋白。優(yōu)化的裂解液配方可以充分釋放各種有隔膜菌絲和無隔膜菌絲蛋白以及各種菌絲bian態(tài)體蛋白，提取過程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(MassSpectrometry,MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

適用樣本：真菌

注：

1. 蛋白提取液A2、蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白提取液A2避免反復(fù)凍融。

3. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

4. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

真菌蛋白提取試劑盒（蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)適用）適用于從各種絲狀真菌中提取總蛋白。優(yōu)化的裂解液配方可以充分釋放各種有隔膜菌絲和無隔膜菌絲蛋白以及各種菌絲bian態(tài)體蛋白，提取過程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、Triton X-100、chaps 等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等成分，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry, MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

需要提取蕈類真菌等大型真菌蛋白質(zhì)可以選用貨號(hào)為 EX1710 的試劑盒。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

1. 使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 提取過程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5. 總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 5種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有 RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：g=r×1.118×10^-5×rpm²（r 為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為 3000rpm，有效離心半徑為 10 cm，則相對(duì)離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二、真菌蛋白提?。?/span>

1. 提取液制備：

將試劑 A1 和試劑 A2 混合，配成蛋白提取液 A，充分混勻備用。

每 500ul 真菌蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 蛋白提取液 A 置 4℃保存，長(zhǎng)期不用的可以分裝后-20℃保存。

2) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

3) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取培養(yǎng)絲狀真菌，在 4℃，5000×g 條件下離心 5-10 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集菌體。

3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 將菌體置于研缽中用液氮研磨至粉末。

【注】：

1) 若無液氮研磨條件，可直接用蛋白提取液研磨。

5. 每 100mg 菌體中加入 300ul-500ul 蛋白提取液，混勻后，在 2-8℃條件下振蕩 20-30 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

6. 在 4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。

7. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到真菌總蛋白。

8. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛴糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

9. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2) 經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸；如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

真菌蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

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