諾博萊德 核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

NobleRyder P5086 核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

產(chǎn)品貨號(hào)：P5086

產(chǎn)品名稱(chēng)：核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

核蛋白提取試劑盒-蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5086 核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動(dòng)物細(xì)胞和各種動(dòng)物實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動(dòng)物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的獨(dú)te配方能夠有效溶解細(xì)胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過(guò)透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(MassSpectrometry,MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動(dòng)物細(xì)胞和各種動(dòng)物實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動(dòng)物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的獨(dú)te配方能夠有效溶解細(xì)胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、Triton X100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過(guò)透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry,MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shi凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5、蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 5 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

使用注意事項(xiàng)：

1. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋

時(shí)試劑損失。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. Western實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用Lamin B、TBP、Histon H3。

操作步驟

1.提取液制備：

將試劑B1和試劑B2混合，配成蛋白提取液B，充分混勻備用。

每500μl蛋白提取液B中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】:

1)蛋白提取液B短期置4℃保存，長(zhǎng)期不用的可以分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

2)根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

3)加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

4)以下步驟中使用的蛋白提取液B為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取5×10⁶-1×10⁷個(gè)細(xì)胞（大約50 mg細(xì)胞/50μl細(xì)胞），在4℃，500×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

【注】

1) 組織樣本用jian刀剪碎，加冷PBS，用組織勻漿器/機(jī)勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。勻漿液在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

3.用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4.大約每20μl細(xì)胞（離心后細(xì)胞沉淀體積）中加入200-300μl冷的提取液A，高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻，置2-8℃條件振蕩10-30分鐘。

【注】:

1)提取液A處理后細(xì)胞體積應(yīng)減少，否則延長(zhǎng)提取液A振蕩處理時(shí)間。

2)使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

3)沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5.然后在4℃，2000×g條件下離心10分鐘。棄上清，收集沉淀。

6.在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。

【注】:

1)加提取液B前，必須盡可能吸干提取液A。否則會(huì)影響核蛋白純度。

2)也可以用PBS將沉淀洗滌一次。PBS重懸沉淀，2000×g離心15分鐘。

3)提取液B用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞數(shù)量情況調(diào)整，細(xì)胞數(shù)量多則多加。也可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)最終蛋白濃度實(shí)際情況調(diào)整。

7. 置2-8℃條件振蕩30-40分鐘。

【注】:

1)使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2)沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3)此步驟蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的蛋白復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理，300 w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，不必進(jìn)行超聲處理。如果引入其他外源性蛋白質(zhì)不影響下游實(shí)驗(yàn)的話，也可以加入DNase處理。

8.在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。

9.將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

10.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】:

1)建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

2)蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

11. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】:

1)蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2)經(jīng)透析或脫鹽處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

核蛋白提取試劑盒-蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用

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