諾博萊德 溶酶體提取試劑盒 蛋白提取

NobleRyder P5107 溶酶體提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：P5107

產(chǎn)品名稱：溶酶體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：溶酶體提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P5107 溶酶體提取試劑盒

溶酶體是由一層單位膜包圍，內(nèi)含多種酸性水解酶的泡狀結構。溶酶體含有40多種水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對細胞內(nèi)物質(zhì)的消化作用。此外溶酶體與器官形成、激素分泌的調(diào)節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關。溶酶體提取試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的溶酶體提取。提取的溶酶體具有生物活性，可以用于溶酶體功能研究、溶酶體染色、溶酶體蛋白提取等各種下游應用?？梢蕴峁┽槍游锛毎⒔M織、植物、真菌、酵母、微生物、藻類、液體、土壤等各種不同樣本的蛋白提取試劑盒?？梢蕴峁┽槍毎?、核、胞質(zhì)、線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、外泌體等細胞不同部位的蛋白提取試劑盒。

適用樣本：動物細胞/組織

注：

1. 提取液長期不用時置于-20℃保存。

2. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

溶酶體是由一層單位膜包圍，內(nèi)含多種酸性水解酶的泡狀結構。溶酶體含有 40 多種水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對細胞內(nèi)物質(zhì)的消化作用。此外溶酶體與器官形成、激素分泌的調(diào)節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關。

溶酶體提取試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的溶酶體提取。提取的溶酶體具有生物活性，可以用于溶酶體功能研究、溶酶體染色、溶酶體蛋白 提取等各種下游應用。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，也可用普通玻璃勻漿器勻漿，但是溶酶體回收率會下降。

4. 若實驗室離心機較小達不到 30000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 30000×g 離心力，請使用能達到的最大離心力。

二、細胞溶酶體提?。?/span>

1. 取 1-2×10⁷ 個細胞，在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞；

【注】：

1) 貼壁培養(yǎng)細胞用yi酶消化下來或者用刮刀刮取均可。

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

1) PBS 重懸細胞，300×g -500×g，2-8°C，離心時間 5 分鐘收集細胞。

3. 加入 400 μl 冷的試劑 A，置冰上靜置 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿 30-40 下。

【注】：

1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

2) 每上下一個來回為一次。

5. 勻漿液在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，3000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，5000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

8. 將上清在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實驗室離心機較小達不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請使用能達到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

9. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

10. 在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實驗室離心機較小達不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請使用能達到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

11. 沉淀用溶酶體保存液 C 重懸。

【注】：

1) 也可以不用試劑 C，直接根據(jù)下游應用用合適的緩沖液重懸保存或直接用于下游蛋白提取等實驗。

12. 即得到溶酶體樣品，置冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

三、組織溶酶體提?。?/span>

1. 取 50-100 mg 新鮮動物組織樣本，用 PBS 清洗干凈。

2. 用手術jian刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

3. 加入 400 μl 冷的試劑 A，置冰上靜置 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿 30-40 下。

【注】：

1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

2) 每上下一個來回為一次。

5. 勻漿液在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，3000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，5000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

8. 將上清在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實驗室離心機較小達不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請使用能達到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

9. 在沉淀中加入 400 μl 冷的試劑 B，混勻。

10. 在 4℃，20000-30000×g 力條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 如果用大的離心轉頭，液體量太少不好離心的話，可以將小離心管套入大離心管使用，或者添加 PBS 增加液體量。

2) 若實驗室離心機較小達不到 20000×g 離心力，或者離心管質(zhì)量不能承受 20000×g 離心力，請使用能達到的最大離心力，只要在 16000×g 以上，也能獲得較好的回收率。

11. 沉淀用溶酶體保存液 C 重懸。

【注】：

1) 也可以不用試劑 C，直接根據(jù)下游應用用合適的緩沖液重懸保存或直接用于下游蛋白提取等實驗。

12. 即得到溶酶體樣品，置冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

9. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

溶酶體提取試劑盒 蛋白提取

產(chǎn)品訂購信息：

P5107  溶酶體提取試劑盒  50T/100T