諾博萊德 線粒體核糖體提取試劑盒 蛋白提取

   NobleRyder P5113 線粒體核糖體提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：P5113

產(chǎn)品名稱：線粒體核糖體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：線粒體核糖體提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5113 線粒體核糖體提取試劑盒

適用樣本：動物細(xì)胞/組織

注：

1. 試劑盒2-8℃保存，開蓋后組份按要求條件保存。

2. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

高等植物中有兩類核糖體：一類存在于細(xì)胞質(zhì)中，沉降系數(shù)為80S；另一類存在于線粒體中。沉降系數(shù)為55S。不同生物的線粒體核糖體在組成與物理化學(xué)性質(zhì)等方面的差異均比細(xì)胞質(zhì)核糖體的大。核糖體是細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)生物合成的部位，同時又與生物體的若干性狀，如抗性突變有關(guān)。

本試劑盒用簡便快速的方法即可快速提取得到線粒體核糖體。

本試劑盒適用于提取新鮮細(xì)胞和組織樣本的線粒體核糖體，用于凍存樣本的提取時由于凍存過程中大部分線粒體可能會被破壞，線粒體核糖體回收率較低。

本試劑盒提取的線粒體核糖體具有生物活性，可以用于線粒體核糖體功能研究、蛋白提取等各種下游應(yīng)用。

本試劑盒需要使用170000×g的離心力，沒有相應(yīng)離心機(jī)的話可以選擇低速離心法的試劑盒，低速離心法試劑盒只需要達(dá)到20000×g以內(nèi)的離心力即可提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，一般的常規(guī)臺式離心機(jī)均可以滿足使用要求。低速離心法試劑盒提取得到的線粒體核糖體純度相對于高速離心法的較低，回收率相當(dāng)。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、勻漿器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2、實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

二、操作步驟

1、取1-2×10

7個細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3min，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

【注】：

①組織樣本，取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈，用shou術(shù)剪刀盡可能剪碎。

2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

①在1000×g條件下離心5分鐘

3、在沉淀中加入500μl-1ml冷的試劑A重懸，置冰上5min

4、將Dounce勻漿液勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5min

【注】：

①先用Dounce勻漿液的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次

②每上下一個來回為一次。

5、將上清液在1000×g條件下離心5分鐘，棄沉淀，收集上清

6、將上清液在2000×g條件下離心5分鐘，棄上清，收集沉淀。

7、將上清液在11000×g條件下離心15分鐘，棄上清，收集沉淀。

8、在沉淀中加入0.5ml提取液B，充分混勻

9、置振蕩器振蕩20min。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

②沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾小時用移液器吹打混勻即可。

10、在200×g條件下離心2分鐘，棄沉淀，收集上清。

11、在1000×g條件下離心2分鐘，棄沉淀，收集上清。

12、將上清液在11000×g條件下離心15分鐘，棄上清，收集沉淀。

13、在沉淀中加入500μl提取液C，充分混勻。

14、在2-8℃振蕩15分鐘。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

②沒有振蕩條件也可以不振蕩，置2-8℃靜置，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾小時用移

液器吹打混勻即可

15、在3000×g力離心5分鐘。棄沉淀，取上清。

16、在10000×g力離心10分鐘。棄沉淀，取上清。

17、將上清在4℃，170000×g力條件下離心60分鐘。棄上清，沉淀即為線粒體核糖體。

【注】：

①如果條件允許，可將離心時間延長到2-24小時。

②液體量較少沒有合適轉(zhuǎn)頭時，可以將小離心管套入大離心管進(jìn)行離心；或者用PBS補(bǔ)充液體量后用合適的離心管離心。

18、用100-400μl線粒體核糖體保存液或其他相應(yīng)的緩沖液重懸沉淀，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

①可以不使用試劑盒中的保存液，根據(jù)需要使用下游試驗(yàn)的緩沖液置-80℃保存。

②保存液中保存的樣本需要重新回收的話，可以采用170000×g條件下離心60min收集沉淀。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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產(chǎn)品訂購信息：

P5113  線粒體核糖體提取試劑盒  50T/100T