NobleRyder C9258 T7表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品貨號(hào)：C9258

產(chǎn)品名稱(chēng)：T7表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：10*100ul/20*100ul

T7表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder C9258 T7表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞為大腸桿菌BL21增強(qiáng)型菌株，為L(zhǎng)on和OmpT蛋白酶缺陷型，主要適用于含有T7啟動(dòng)子的原核表達(dá)載體（如pET等）的蛋白表達(dá)，同樣適用于需要大腸桿菌RNA聚合酶來(lái)轉(zhuǎn)錄RNA的非T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體（如pGEX等）。該菌株區(qū)別于BL21(DE3)菌株的優(yōu)勢(shì)在于T7RNA聚合酶基因整合在細(xì)菌染色體上的lac操縱子區(qū)域，基因組中無(wú)λ前噬菌體序列，并具有抗T1噬菌體感染等特點(diǎn)。T7表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于108cfu/μg。

基因型:fhuA2lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 (mcrCmrr)114::IS10

菌株抗性：對(duì)氨芐qing霉素，卡na霉素，壯guan霉素，氯霉su，鏈霉su和四環(huán)su敏感。

操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒DNA或5-10μL連接產(chǎn)物到細(xì)胞中，用手指撥da管底，輕輕混勻；

2. 冰水浴中放置30分鐘，不要晃動(dòng)；

3. 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動(dòng)；

4. 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動(dòng)；

5. 加入500μL無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基；

6. 置于37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘；

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

（平板劃線(xiàn)分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心30秒鐘，棄掉上清，留100μL左右的液體，用200μL 吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μL重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來(lái)回劃線(xiàn)。這個(gè)方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）

（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟2的時(shí)間縮短到5分鐘，對(duì)于氨芐青霉su抗性的質(zhì)粒，步驟4完成后，可直接涂布或劃線(xiàn)于含氨芐青霉su抗性的LB平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需60分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng)。）

注意事項(xiàng)：

1．感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3．轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

T7表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建 

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C9258 T7表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞  10*100ul/20*100ul