NobleRyder BC9953還原型谷胱gan肽(GSH)含量檢測(cè)試劑盒 Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC9953

產(chǎn)品名稱：還原型谷胱gan肽(GSH)含量檢測(cè)試劑盒 Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T/96S

還原型谷胱gan肽GSH含量檢測(cè)試劑盒 抗逆

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：還原型谷胱gan肽(GSH)含量檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

別名：還原型谷胱gan肽試劑盒 GSH Kit 還原型谷胱gan肽（GSH）試劑盒 還原型谷胱gan肽（GSH）測(cè)試盒

規(guī)格：100T/96S

檢測(cè)方法：微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC9953還原型谷胱gan肽(GSH)含量檢測(cè)試劑盒 Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

測(cè)定意義：GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。

測(cè)定原理：DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。

需要的儀器，耗材:低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

產(chǎn)品說明:

谷胱gan肽是由谷an酸(Glu)、半胱an酸(Cys)和甘an酸(Gly)組成的天然三肽，是一種含巰基(-SH)的化合物，廣泛存在于動(dòng)物組織、植物組織、微生物和酵母中。谷胱gan肽能和5,5'-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(5,5-dithiobis-2-nitrobenoicacid，DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-巰基苯甲酸和谷胱gan肽二硫化物(GSSG)。2-硝基-5-巰基苯甲酸為黃色產(chǎn)物，在波長(zhǎng)412nm處具有最大光吸收。

技術(shù)指標(biāo):

最di檢出限:3.763μg/mL

線性范圍:12.5-400μg/mL

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織，加入ImL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿(勻漿器/研缽提前放冰上預(yù)冷)。12000g，4℃離心10min，取上清液放置于4℃待測(cè)。若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80C保存(可保存3天)。

2.細(xì)菌、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(106個(gè)):試劑一體積(mL)為5~10:1的比例(建議5百萬細(xì)胞加入ImL試劑一)，反復(fù)凍融2-3次(可在液氮中凍結(jié)、37C水浴中溶解)或者冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率200w，超聲3s,間隔10s，重復(fù)30次)，12000g，4℃離心10分鐘，取上清置于冰上待測(cè)。若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存3天)。

3.血液處理

血漿:將收集的抗凝血于4℃，600g離心10分鐘，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體積的試劑一，沸水浴5min(纏封口膜，防止爆蓋)。之后12000g，4℃離心10分鐘，將上清移入新的試管中放置于4C待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80C保存(可保存3天)。

血細(xì)胞:將收集的抗凝血于4C，600g離心10分鐘，棄去上層血漿用3倍體積的PBS清洗3次(用PBS重懸血細(xì)胞，600g離心10分鐘)，加入等體積試劑一，沸水浴5min(纏封口膜，防止爆蓋)。之后12000g，4℃離心10分鐘，吸取上清放于4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80C保存(可保存3天)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備:吸取10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液,用蒸餾水稀釋至300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL。

三、GSH含量計(jì)算

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x，μg/mL)和吸光度△A標(biāo)準(zhǔn)(y，△A標(biāo)準(zhǔn))，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將△A(y，△A)帶入公式計(jì)算樣本濃度(x，μg/mL).

2.GSH含量計(jì)算:

(1)按蛋白濃度計(jì)算

GSH含量(μg/mg prot)=xxV樣+(V樣xCpr) =x-Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

GSH含量(μg/g質(zhì)量) =xxV 樣+(V 樣+V 樣總xW)=x+W

Solarbio

(3)按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

GSH含量(μg/106cell) =xxV 樣÷(V 樣÷V 樣總xN)=x÷N

(4)按血漿(血細(xì)胞)體積計(jì)算

GSH含量(μg/mL)=2x

V樣總:上清液總體積，1mL:V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02mL;W:樣本質(zhì)量，g:

Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL;N:細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量，以106為單位計(jì);2:稀釋倍數(shù)，血漿(血細(xì)胞)體積被稀釋一倍。

注意事項(xiàng):

1、若不確定樣本中GSH含量的高低，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。

2、因?yàn)樵噭┮恢泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑，因此上清液不能月于蛋白濃度測(cè)定。如需測(cè)定蛋白含量，需另取組織。

3、如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

還原型谷胱gan肽GSH含量檢測(cè)試劑盒 抗逆 

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