β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

β－葡萄糖醛酸苷酶試劑盒 糖代謝

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

β-GD 廣泛存在于動物組織中，是一種參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程的基質(zhì)降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛suan和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細(xì)胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富，測定胃液β-GD活性對于研究胃癌具有重要的意義。

測定原理：

β-GD 催化苯fen β-D-葡萄糖醛酸產(chǎn)生游離的酚tai，通過測定苯fen含量反應(yīng)該酶活性高低。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 2ml 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑仍-20℃保存；試劑四：1μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)儲備液 10ml，4℃保存；

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測定的前處理：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

混勻后，37℃反應(yīng) 30min

混勻， 540nm 下測定各管吸光值

注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次。

β-GD 活性計算：

按樣本鮮重計算：

單位定義：每小時每g 鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol 酚tai的量為一個活力單位。

β-GD（μmol/h/g 鮮重）= (C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(W×V1÷V2)÷T=2×

（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W

按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每小時每mg 組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol 酚tai的量為一個活力單位。

β-GD（μmol/h/mg prot）= (C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(V1×Cpr)÷T=2×

（A 測定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度， 1μmol/ml；V1：加入樣本體積：0.01ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

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