總糖含量試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

總糖含量試劑盒 糖代謝

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)?？偺且部煞Q為碳水化合物，包括可溶性的單糖，二糖以及不溶性的淀粉，纖維素，幾丁質(zhì)等。

測(cè)定原理：

總糖酸水解為還原糖，在 NaOH 和丙三醇存在下，DNS 試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物，在過量的NaOH 堿性溶液中呈桔紅色，在 540nm 處有最大吸收峰，以此測(cè)定樣品中的總糖含量。

組成：

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、沸水浴、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、蒸餾水。

樣品中總糖的提取：

組織：稱取約 0.1g 樣品，加入 1ml 試劑一，1.5ml 蒸餾水，勻漿，95℃水浴中加熱 30min，加入 1ml試劑二，混勻，用蒸餾水定容至 10ml，8000g 25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。（注意稀釋，見注意事項(xiàng)）液體樣本：取 0.1ml 樣本，加入 1ml 試劑一，1.5ml 蒸餾水，勻漿，95℃水浴中加熱 30min，加入 1ml 試 劑二，8000g 25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。（注意稀釋，見注意事項(xiàng)）

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。

3、加樣表：

混勻，置 95 度水浴中 10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至室溫

混勻，540nm 測(cè)定吸光值，ΔA=A 測(cè)定管-A 空白管

注意：1、空白管只要做一管。

2、如果ΔA 大于 2，需要將上清液用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

總糖含量計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.3002x - 0.0507；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值。

2、按樣本鮮重計(jì)算：

總糖（mg /g 鮮重）= [(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（W×V1÷V2）×稀釋倍數(shù)=33.311×(ΔA＋0.0507) ÷W×稀釋倍數(shù)。

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

總糖（mg /mg prot）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀釋倍數(shù)=3.3311×(ΔA＋0.0507) ÷Cpr×稀釋倍數(shù)。

V1：加入樣本體積，0.008ml；V2：加入提取液體積，10ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

4、按照液體體積計(jì)算：

總糖（mg /ml）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（V3×V1÷V2）×稀釋倍數(shù)=116.59×(ΔA＋0.0507)×稀釋倍數(shù)。

V1：加入樣本體積，0.008ml；V2：加入提取液體積，10ml/3.5ml； V3:液體樣本，0.1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

注意：最di檢測(cè)限為 1mg/g 鮮重或 10ng/mg prot

總糖含量試劑盒 糖代謝