土壤總磷/有機磷/無機磷含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

土壤總磷/有機磷/無機磷含量測定試劑盒-

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。

測定原理：

利用鉬藍法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量，即可計算出有機磷含量。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 8ml 蒸餾水，充分溶解后加入 4ml 試劑二，混勻。

標準品：液體×1 支，20 μmol/L 無機磷標準品，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?。

土壤不同形態(tài)磷提取：

無機磷：稱取通過 100 目篩子的風干土樣 0.01g，轉(zhuǎn)移到 1ml 離心管，加入 1ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃離心 10min，取上清液一，用于無機磷含量測定。

總磷提取：取通過 100 目篩子的風干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.01g，轉(zhuǎn)移到 1 ml 離心管，加入 1ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃離心 10min，取上清液二，用于總磷含量測定。

測定步驟：

分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

空白管：取EP 管，依次加入 100μl 蒸餾水，100μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 空白管。

標準管：取EP 管，依次加入 10μl 標準液，90μl 蒸餾水，100μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 標準管。

測定管：取EP 管，依次加入 10μl 上清液一或者上清液二，90μl 蒸餾水，100μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

土壤磷含量計算：

使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C 標準液×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×V 總÷W =0.02×(A

測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)÷W

C 標準液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，1 ml=0.001 L。

土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標準液×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×V 總÷W=0.02×(A測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)÷W

C 標準液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，1ml=0.001 L。 3.土壤有機磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無機磷

使用 96 孔板測定的計算公式如下

土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C 標準液×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×V 總÷W =0.02×(A測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)÷W

C 標準液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，1 ml=0.001 L。

土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標準液×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×V 總÷W=0.02×(A測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)÷W

C 標準液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，1ml=0.001 L。 4.土壤有機磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無機磷。

注意事項：

試劑三配制過程中，可能會產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。

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