土壤漆酶（Soil Laccase，SL）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/48S

土壤漆酶試劑盒 土壤系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強(qiáng)的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測(cè)方面有非常廣泛的應(yīng)用。

測(cè)定原理：

漆酶分解底物ABTS 產(chǎn)生ABTS 自由基，在 420nm 處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測(cè)定 ABTS 自由基的增加速率，可計(jì)算得漆酶活性。

試劑組成和配制：

工作液：粉劑×2 瓶，4℃避光保存，臨用前每瓶加 10ml 試劑一溶解。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀。

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過(guò) 30-50 目篩。

測(cè)定步驟：

1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 420nm，蒸餾水調(diào)零。

37℃震蕩反應(yīng) 10min，冰浴 5min，10000g，4℃離心 5min，分別取上清 200μl 于 420nm 處測(cè)定吸光值，記為記為A 對(duì)照和A 測(cè)定?！鰽=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

酶活性計(jì)算公式：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物ABTS 所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）。

SL 活性（nmol/min /g 土樣）=

?A

?? d

×V 反總÷W÷T= 0.694×△A÷W

ε：ABTS 毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.25ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，10min

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物ABTS 所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）。

SL 活性（nmol/min /g 土樣）=

?A

?? d

×V 反總÷W÷T= 1.388×△A÷W

ε：ABTS 毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.25ml；

W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，10min

注意事項(xiàng)：

1、工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。

2、測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

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