| 供貨周期 |
現(xiàn)貨 |
規(guī)格 |
1×10^6 |
| 貨號 |
BH3525 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
HepaRG 人肝癌細(xì)胞
產(chǎn)品貨號：BH3525
產(chǎn)品規(guī)格：1×10^6
細(xì)胞鑒定STR鑒定已通過
細(xì)胞來源國外
細(xì)胞背景建立于年齡未知的女性丙肝患者。來源于單一供體。
細(xì)胞特性 形態(tài)：上皮樣,貼壁生長。 用途：僅供科研使用。
HepaRG 人肝癌細(xì)胞
細(xì)胞鑒定STR鑒定已通過
細(xì)胞來源國外
細(xì)胞背景建立于年齡未知的女性丙肝患者。來源于單一供體。
細(xì)胞特性 形態(tài)：上皮樣,貼壁生長。 用途：僅供科研使用。
培養(yǎng)條件1）準(zhǔn)備William's E+ FBS 10%+2mM 谷氨酰胺+5.25ug/ml 胰島素+50uM 氫化可的松+P/S 1%
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。注意事項
1.培養(yǎng)密度不要超過80%，密度過高時細(xì)胞可能自發(fā)分化。
2.包被試劑對這個細(xì)胞影響不是特別大。如果用包被試劑會更好，不用的話，貼壁弱一些，但不會影響細(xì)胞的狀態(tài)，包被試劑包被培養(yǎng)皿讓細(xì)胞更好貼壁，推薦使用：Applied Cell Extracellular Matrix (G422)
3.若使用包被試劑，這個細(xì)胞消化時間比較長，放在培養(yǎng)箱里消化是 4-6min左右（細(xì)胞消化時間與所用胰酶效價、消化時候細(xì)胞密度、細(xì)胞貼壁強弱以及溫度等因素有關(guān)，建議第一次消化時候，多在顯微鏡下觀察，以找到優(yōu)良消化時間）。
HepaRG 人肝癌細(xì)胞貼壁細(xì)胞參考：
一. 收貨后消毒靜置待細(xì)胞全部穩(wěn)定后拍照。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細(xì)胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩等脫落90%以上終止消化，一般小于1分鐘以內(nèi)，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細(xì)胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細(xì)胞則置于37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每40-50秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細(xì)胞脫落，如果脫落90%以上則對應(yīng)3-6ml含有10%血清的培養(yǎng)基終止結(jié)束，以防胰酶殘留。如果貼壁非常牢固的細(xì)胞，脫落的比例比較低，也不超過2分鐘后終止消化結(jié)束，再加入1ml培養(yǎng)基讓細(xì)胞緩沖后再過2分鐘進(jìn)行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護(hù)細(xì)胞膜?；虿捎霉萎a(chǎn)刮細(xì)胞的方式處理也可以。總歸原則是達(dá)到消化目的的同時減少細(xì)胞膜受到的損傷越小越好。
三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。期間多的細(xì)胞一定保存多份細(xì)胞凍存管備種。
運輸形式常溫發(fā)貨：收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-6小時后觀察密度和狀態(tài)并拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存足量種子后才擴增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。
干冰發(fā)貨：常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個復(fù)蘇不成功時嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個，均沒有復(fù)蘇成功的情況及時留存復(fù)蘇照片通知銷售處理售后問題。
生物安全1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
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