細胞名稱：人子宮內(nèi)膜異位癥上皮細胞-12Z

種屬來源：人

組織來源：子宮

細胞形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基:：D/F12+10%FBS+PS

細胞培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm 皿中，加入約4 mL

培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

b、加 1 mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 2-3ml 培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm 離心 5 min，棄去上清液，補加 1-2 mL 培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8 mL 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液，用PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。.觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意： 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。