人毛乳頭細(xì)胞

人毛乳頭細(xì)胞分離自皮膚組織；毛乳頭是一個可誘導(dǎo)毛囊生長、調(diào)控毛囊發(fā)育和周期性生長的結(jié)構(gòu)，由細(xì)胞外基質(zhì)及成纖維細(xì)胞構(gòu)成，幾乎整個被毛囊下部的上皮基質(zhì)包繞。毛乳頭在毛囊的形態(tài)學(xué)發(fā)生和毛囊周期性生長調(diào)控中起主導(dǎo)作用。在毛囊的下端，毛發(fā)基質(zhì)由上皮細(xì)胞組成，這些細(xì)胞被真皮鞘及真皮乳頭包裹，進(jìn)入到不同的分化程序，形成外毛根鞘、內(nèi)毛根鞘及毛干。體外培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞形態(tài)呈細(xì)長梭形，聚集、卷曲呈長條狀。

本公司生產(chǎn)的人毛乳頭細(xì)胞采用胰蛋白酶和膠原酶混合消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells，細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。培養(yǎng)基信息： 

培養(yǎng)基內(nèi)容：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、Penicillin、Streptomycin等

為保證細(xì)胞體外培養(yǎng)最佳狀態(tài)我們推薦使用人毛乳頭細(xì)胞專用培養(yǎng)基作為體外培養(yǎng)人毛乳頭細(xì)胞專用培養(yǎng)基。

  使用方法

在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，人毛乳頭細(xì)胞可傳3-5代左右；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。

一、客戶收到細(xì)胞操作如下

1. 取出25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)；

2. 觀察細(xì)胞生長情況，細(xì)胞密度低于80%時，貼壁細(xì)胞倒去瓶中培養(yǎng)液，留下8ml作用繼續(xù)培養(yǎng)；細(xì)胞密度大于80%時，即可進(jìn)行傳代；

3. 吸出25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS洗滌3次；

4. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴2-3min左右；倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓，透亮?xí)r即可終止消化，加入雙倍培養(yǎng)液輕輕吹打細(xì)胞使其變成單細(xì)胞懸液；

5. 收集細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，觀察細(xì)胞沉淀；

6. 加入1ml的培養(yǎng)液，輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，均勻分配至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，初次傳代建議按照1：2比例進(jìn)行

7. 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的培養(yǎng)基。

二、細(xì)胞凍存管復(fù)蘇

1. 提前室溫預(yù)熱培養(yǎng)基，將水浴鍋調(diào)至37℃；

2. 在超凈工作臺內(nèi)提前準(zhǔn)備好15ml離心管，并加入5ml的培養(yǎng)基；

3. 將凍存管快速放入水浴鍋中，不斷晃動凍存管，直至管內(nèi)冰塊全部融化

4. 然后快速取出，噴灑酒精，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺；

5. 擰開凍存管螺紋蓋，用移液槍將細(xì)胞懸液輕輕吸出，轉(zhuǎn)移至含5ml培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

6. 離心結(jié)束后，觀察有無細(xì)胞沉淀，將上清棄去，加入1ml新鮮的培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打成細(xì)胞懸液；將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，T25培養(yǎng)瓶建議培養(yǎng)基加入量5-7ml，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分散均勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細(xì)胞凍存

1. 凍存條件：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO或者無血清凍存液

2. 保存條件：液氮存儲

人毛乳頭細(xì)胞