產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 |
現(xiàn)貨 |
規(guī)格 |
10 ×100ul/100×100ul |
貨號(hào) |
CC96164 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
BL21(DE3)/pLysS)感受態(tài)
產(chǎn)品貨號(hào):CC96164
產(chǎn)品規(guī)格:10 ×100ul/100×100ul
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用,不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
BL21(DE3)/pLysS)感受態(tài)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
BL21(DE3)/pLysS 菌株攜帶 pLysS 質(zhì)粒,具有氯霉素抗性。pLysS 含有表達(dá) T7 溶菌酶的基因,T7 溶菌酶
可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾
IPTG 誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了 λ(DE3)序列,可表達(dá) T7 RNA
聚合酶,適合于 T7 啟動(dòng)子系列質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。該感受態(tài)細(xì)胞經(jīng) pUC18 質(zhì)粒檢測(cè),其轉(zhuǎn)化效率高達(dá) 108
cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
BL21(DE3)/pLysS
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:F- ompT hsdS (rB-mB-) gal dcm (DE3) pLysS CamR
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存;請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
產(chǎn)品特性
-該菌株為 recA+基因型,故不用于質(zhì)粒的保存;
-屬于大腸桿菌 B 株系列,可用于以 T7 RNA 聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的蛋白表達(dá);
-pLysS 含有表達(dá) T7 溶菌酶的基因,T7 溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,能夠
降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾 IPTG 誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。
質(zhì)量控制
除 pLysS 外,無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動(dòng),熱激 90 s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min;
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率,整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。
BL21(DE3)/pLysS)感受態(tài)
