諾博萊德  DNA病毒基因組提qu試劑盒 DNA Viral Genome Extraction Kit

DNA病毒基因組提qu試劑盒  質(zhì)粒提取

產(chǎn)品貨號(hào)：D0288

產(chǎn)品名稱：DNA病毒基因組提qu試劑盒 DNA Viral Genome Extraction Kit

英文名稱：DNA Viral Genome Extraction Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：酶附件-20℃，其它試劑RT，復(fù)檢期1年

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderD0288  DNA病毒基因組提qu試劑盒本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提qu DNA病毒基因組，不適合于RNA病毒基因組的提qu。使用本試劑盒提qu的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

操作步驟（僅供參考）：

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽（每瓶漂洗液加45mL無(wú)水乙醇）。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

1、 qu病毒上清液0.5 mL，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀。

2、 向病毒上清中加入20 μL的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3、 向管中加入500 μL溶液V，充分混勻。再向管中加入400 μL無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提qu，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的最大容積為750 μL，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）

4、 12000rpm 離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

5、 向吸附柱中加入 600 μL 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm 離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6、 向吸附柱中加入600 μL漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、 12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

8、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50 μL-100 μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。

9、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的病毒基因組DNA。

注意事項(xiàng):

1、蛋白酶K需放置-20℃保存。

2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提qu的DNA片段較小且提qu量也下降。

3、若溶液V中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用，不影響效果。

4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50 μL，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。

5、DNA濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組DNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。D260值為1.0相當(dāng)于大約50 ug/ mL雙鏈DNA、40 ug/ mL單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。

6、如果病毒含量過(guò)低，最后提qu的基因組DNA電泳可能無(wú)法檢測(cè)到，但PCR等其他實(shí)驗(yàn)還會(huì)有結(jié)果。

DNA病毒基因組提qu試劑盒  質(zhì)粒提取

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D0288  DNA病毒基因組提qu試劑盒 DNA Viral Genome Extraction Kit  50T/100T