諾博萊德 核蛋白提取試劑盒（無(wú)去垢劑）

核蛋白提取試劑盒(無(wú)去垢劑）常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5072

產(chǎn)品名稱(chēng)：核蛋白提取試劑盒（無(wú)去垢劑）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：核蛋白提取試劑盒（無(wú)去垢劑）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5072 核蛋白提取試劑盒（無(wú)去垢劑）

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動(dòng)物細(xì)胞和各種動(dòng)物實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動(dòng)物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測(cè)定等蛋白研究。

本試劑盒的所有組份均不含去垢劑成分，最后得到的蛋白樣品的成分對(duì) NI 柱純化、分子篩、離子交換、親和純化等下游應(yīng)用沒(méi)有去垢劑影響。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過(guò)透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿(mǎn)足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品脫鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

適用樣本：細(xì)胞、組織。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液（pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））（phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5. 蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. Western實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用Lamin B、TBP、Histon H3。

二、細(xì)菌蛋白提取：

1.提取液制備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑。

每 200μl 冷的蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2.取 5-10×10⁶個(gè)細(xì)胞，在 4℃，500×g 力條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

3.用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4.每 20μl 體積細(xì)胞沉淀（約 20 mg，2×10⁶個(gè)細(xì)胞）中加入 200-300μl 冷的提取液 A，高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻，置 2-8℃條件振蕩 10-30 分鐘。

【注】：

1) 提取液 A 處理后細(xì)胞體積應(yīng)減少，否則延長(zhǎng)提取液 A 振蕩處理時(shí)間。

2) 如果需要同時(shí)收集胞質(zhì)蛋白，可以稍微減少試劑 A 的用量，以提高獲得的胞質(zhì)蛋白樣品的濃度。

3) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

4) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5.然后在 4℃，2000×g 條件下離心 5 分鐘。

6.將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

7.在沉淀中加入 80-200μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒。

【注】：

1) 加提取液 B 前，必須盡可能吸干提取液 A。否則會(huì)影響核蛋白純度。

2) 也可以用 PBS 將沉淀洗滌一次。PBS 重懸沉淀，12000g 離心 5 分鐘。

3) 提取液 B 用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞數(shù)量情況調(diào)整，細(xì)胞數(shù)量多則多加。也可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)最終蛋白濃度實(shí)際情況調(diào)整。

8.置 2-8℃條件振蕩 30-40 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3) 此步驟蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的蛋白復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理，300w/10 秒間隔 10 秒，超聲 3 分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí)，不必進(jìn)行超聲處理。

如果引入其他外源性蛋白質(zhì)不影響下游實(shí)驗(yàn)的話(huà)，也可以加入 DNase 處理。

9.在 4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。

10.將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

11.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

三、組織蛋白提?。?/span>

1.提取液制備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑。

每 200μl 冷的蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2.取適量組織樣本用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，每 20 mg 樣本中加入 200-300μl 冷的提取液 A，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。

3.勻漿液置 2-8℃條件振蕩 10-30 分鐘。

【注】：

1) 提取液 A 處理后細(xì)胞體積應(yīng)減少，否則延長(zhǎng)提取液 A 振蕩處理時(shí)間。

2) 如果需要同時(shí)收集胞質(zhì)蛋白，可以稍微減少試劑 A 的用量，以提高獲得的胞質(zhì)蛋白樣品的濃度。

3) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

4) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4. 然后在 4℃，2000×g 力條件下離心 5 分鐘。

5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

6. 在沉淀中加入 80-200μl 冷的蛋白提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒。

【注】：

1) 加提取液 B 前，必須盡可能吸干提取液 A。否則會(huì)影響核蛋白純度。

2) 也可以用 PBS 將沉淀洗滌一次。PBS 重懸沉淀，12000g 離心 5 分鐘。

3) 提取液 B 用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞數(shù)量情況調(diào)整，細(xì)胞數(shù)量多則多加。也可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)最終蛋白濃度實(shí)際情況調(diào)整。

7. 置 2-8℃條件振蕩 30-40 分鐘，至無(wú)明顯沉淀。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3) 此步驟蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物

為含有基因組 DNA 等的蛋白復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理，300w/10 秒間隔 10 秒，超聲 3 分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí)，不必進(jìn)行超聲處理。

如果引入其他外源性蛋白質(zhì)不影響下游實(shí)驗(yàn)的話(huà)，也可以加入 DNase 處理。

8. 在 4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。

9. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

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