諾博萊德 P5080 細(xì)菌蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

細(xì)菌蛋白提取試劑盒（無去垢劑）常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P5080

產(chǎn)品名稱：細(xì)菌蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：細(xì)菌蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5080 細(xì)菌蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

適用樣本：細(xì)菌

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

細(xì)菌總蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取總蛋白，包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌，可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。

本試劑盒的所有組份均不含去垢劑成分，最后得到的蛋白樣品的成分對 NI 柱純化、分子篩、離子交換、親和純化等下游應(yīng)用沒有明顯影響。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便：不需昂貴設(shè)備。

2. 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3. 將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

4. 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

6. 紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

7. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

8. 本試劑盒中不有 EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 本試劑盒中提取液和蛋白酶抑制劑中均不含EDTA，根據(jù)需要可自行加入。

二、細(xì)菌蛋白提?。?/span>

1. 裂解液的準(zhǔn)備：

根據(jù)所需要提取的樣本量，每 500ul 裂解液中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑混合物和 5ul 蛋白穩(wěn)定液，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 在 4℃， 10000×g 條件下將菌液離心 5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。

3. 用 PBS 洗菌體 2 次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。

4. 按每 50-100mg 濕重菌體樣本加入 500ul 裂解液，吹打混勻，2-8℃振蕩 20-30 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5. 在 150W-300w，10s 超聲/10s 間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。

【注】：

1) 此步可以選做，沒有超聲條件的話可以不超聲，延長上步驟振蕩時(shí)間即可，至菌體充分裂解。

2) 超聲時(shí)間盡量短，提取液變清即可，一般不超過 20 分鐘。

3) 如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀，說明超聲功率過大，需要降低功率。

4) 避免產(chǎn)生泡沫。

6. 在 4℃， 12000×g 條件下將菌液離心 5 分鐘，將上清移入冷的干凈離心管。

7. 即得到細(xì)菌總蛋白樣品。

8. 將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸；如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

細(xì)菌蛋白提取試劑盒（無去垢劑）常備現(xiàn)貨

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