目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T豬呼腸孤病毒（PRV）熒光PCR檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/盒 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-D-0270 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Porcine Reovirus Detection Kit |
| 保存條件 | -20℃±5℃，避光保存 | 有效期 | 12個月 |
產(chǎn)品簡介：
豬呼腸孤病毒屬于 呼腸孤病毒科（Reoviridae）正呼腸孤病毒屬（Orthoreovirus）。病毒通過糞-口途徑和呼吸道傳播，也可經(jīng)胎盤垂直感染。主要引起豬的消化道疾病（如嚴重腹瀉、腸炎）和呼吸道疾病，部分毒株可導致腦炎、肺炎甚至多器官衰竭。實驗感染顯示，新生仔豬感染后死亡率可達 100%，臨床表現(xiàn)為急性腸胃炎。
本試劑盒適用于檢測的豬的腸粘膜、腸系膜淋巴結組織、排泄物和肛拭子等樣本中豬呼腸孤病毒 RNA，適用于豬呼腸孤病毒病毒感染的輔助診斷。
產(chǎn)品特點：
一、嚴格的質(zhì)控體系
所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結果更可信。
二、高靈敏度
產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的豬呼腸孤病毒核酸，不放過任何潛在的感染風險。
三、便捷操作
綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。
四、多樣的檢測驗證樣本
該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證，適用于腸粘膜、腸系膜淋巴結組織、排泄物和肛拭子等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。
五、個性化定制服務
專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實際的檢測方案。
六、豐富的產(chǎn)品線
除了豬呼腸孤病毒（PRV）熒光PCR檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。
七、完善的售前售后服務
我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品規(guī)格
50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。
檢測方法
實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優(yōu)點。
適用儀器
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
標本采集
病死或撲殺豬，取腸粘膜、腸系膜淋巴結組織；待檢活豬，取排泄物、肛拭子，放入 1mL50%甘油生理鹽水中。
保存和運輸
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。
使用方法：
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
組織樣品：用無菌的剪刀和鑷子剪取待檢樣品 2.0g 于研缽或組織勻漿器中充分研磨，再加 10.0mLPBS 混勻， 2000r/min 離心 5 min 后，取 1.0ml 上清液轉入無菌 1.5mL 滅菌離心管中，編號備用。排泄物：取 0.5g 于 1.5mL 滅菌離心管中，加入 1mL 生理鹽水渦旋振蕩，8000rpm 離心 2min，取上清液 200μL 于 1.5mL 滅菌離心管中， 編號備用。
1.2核酸提取
推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取， 請按照試劑說明書進行操作。
2.試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿
10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑PRV 反應液酶液
用量（樣本數(shù)為 N）19μL1μL
將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。
3.加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。
4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi)；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇
ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置：
步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號
11 cycle50℃10min否
21 cycle95℃2min否
345 cycles95℃15sec否
60℃30sec是
5.結果分析判定
5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）
反應結束后自動保存結果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結果無Ct 值，且無特異性擴增曲線；
可疑：樣本檢測結果 40＜Ct 值≤45，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 40<Ct 值≤45，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性。
5.3質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
6.檢測方法的局限性
1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關；
2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結果；
3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結果；
4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果；
7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
注意事項：
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
9.本產(chǎn)品僅供科研。
選擇我們的豬呼腸孤病毒（PRV）熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！
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