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產(chǎn)品簡介：

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的 主要方法，但是單獨配制各種溶液十分繁瑣，為了解決此問題，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點：

1.一站式，即開即用，用戶不需單獨準(zhǔn)備各種成分，十分方便。

2.安全，將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到最-低。

3.靈活，用于可以用 30%的丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺母液，自行配制各種濃度的PAGE 膠，滿足分離不同大小蛋白質(zhì)的需求。

4.使用含染料的改良濃縮膠緩沖液，濃縮膠呈藍(lán)色，便于上樣時識別加樣孔。

5.電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。

6.SDS-PAGE 電泳試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成份規(guī)格包裝

5×SDS-PAGE 上樣液1 mL1.5 mL 綠蓋管

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸和保存，但 5×SDS-PAGE 上樣液需低溫運(yùn)輸，-20℃保存。有效期一年。

自備試劑

去離子水

使用方法：

注意：第一次使用本產(chǎn)品時需先配制 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺（19:1）溶液

（30% AB 溶液，下同）

1.在本產(chǎn)品提供的裝有 57g 丙烯酰胺/3g 甲叉雙丙烯酰胺干粉的瓶中加入 146 mL 自備的去離子水，充分搖晃 10-20 分鐘即得 200 mL 30%丙烯酰胺/甲

叉雙丙烯酰胺（19:1）溶液（以下簡稱 30%AB 溶液）。丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺比例在 19:1 時，PAGE 膠的孔徑最小，分辨率最高。配好的 30%AB 溶液最好 4℃避光保存并在 1 月內(nèi)用完。

2.根據(jù)平板的面積和膠的厚度估計需要配制的濃縮膠和分離膠的體積。并根 據(jù)要分離的蛋白質(zhì)的大小確定選擇濃縮膠和分離膠的濃度，參考下表:

注：如果上樣體積少于 10uL，可以不需要濃縮膠。

3.配制 10%的 APS（過硫酸銨）：稱 0.1 克過 APS 干粉到 1 mL 去離子水中， 搖晃溶解。沒用完的 10%APS 溶液需 4℃存放，一周后就不能再用。

4.配制分離膠溶液：在一個 25 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30% 的 AB 溶液和 4×分離膠緩沖液。以下是配制 10 mL 膠的用量，更大體積則各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

5.配制濃縮膠溶液（一般使用 4%的濃度）：在一個 25 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%AB 溶液和 4×濃縮膠緩沖液。以下是配制 10 mL 4%濃縮膠的用量，丙烯酰胺溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

用量（單位：mL）

濃縮膠濃度

4%

水

6.17

30%AB 溶液

1.33

4×改良濃縮膠緩沖液2.50

6.將分離膠和濃縮膠溶液搖晃混勻，抽真空 10-15 分鐘以去除溶液中的氧氣

（氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng)，不去除將影響丙烯酰胺聚合反應(yīng)，膠凝固時間會更長）。

7.各加入 50 uL 10%APS 和 40 uL TEMED（這是配制 10 mL 分離膠和濃縮膠的用量，更大體積的膠則用量需按比例增加)，迅速搖勻。

8.先灌分離膠，在分離膠的液面距離頂部 1.5 cm 的時候，停止灌膠。

9.由于分離膠比重較大，可以立即在上面灌濃縮膠，但灌注時必須小心，不要破壞分離膠和濃縮膠的交接面，在濃縮膠液面達(dá)到頂部時停止灌膠，插入梳子， 室溫聚合 30-60 分鐘。也可以等分離膠在室溫聚合 30-60 分鐘，膠凝固后再灌制。

10.拔出梳子，用 1×SDS-PAGE 電泳液沖洗加樣孔。本產(chǎn)品提供 20 升的 SDS- PAGE 電泳液干粉，將所有干粉溶解在 2L 去離子水中即得 10×SDS-PAGE 電泳液（測 pH 應(yīng)該在 8.3，如果不是 8.3 務(wù)必-用 NaOH 或HCl 調(diào)到8.3），用時再用去離子水稀釋成 1×工作液。

11.將凝膠板固定在電泳裝置上，往上下槽加入足夠的 1×SDS-PAGE 電泳液。

12.在待電泳的蛋白質(zhì)樣品中加入 5×SDS-PAGE 上樣液(4uL 樣品中加 1uL 上樣液)，100℃煮沸 3-5 分鐘。短暫離心，取上清上樣。

13.先用 10 mA 的電流電泳（對 0.75 mm 厚×14 cm×14 cm 的膠)直到染料進(jìn)入從濃縮膠進(jìn)入分離膠。

14.將電流增加到 15 mA，直到染料進(jìn)入分離膠底部時終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的染色等實驗處理。

選擇我們的SDS-PAGE 電泳試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護(hù)航！