目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>溶液>> 單細(xì)胞裂解液(RNA 專用)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1mL |
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貨號 | XY-D-1677 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Single Cell Lysis Buffer(For RNA) |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 12個月 |
產(chǎn)品簡介:
單細(xì)胞裂解液(RNA 專用)是單細(xì)胞 RNA 提取專用裂解液,產(chǎn)品經(jīng)過多次優(yōu)化,含有多種去污劑、變性劑和鹽,可有效抑制核酸酶在裂解過程中對核酸的 破壞,維持核酸的穩(wěn)定性。單細(xì)胞裂解物可以直接用于測序和 RT-PCR 等試驗。
本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上,一次可以處理 1-1000 個細(xì)胞。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品規(guī)格
1mL
保存和運(yùn)輸
低溫運(yùn)輸,﹣20℃保存,有效期一年。
自備試劑
PBS 溶液
使用方法:
如何制備單個細(xì)胞取決于實驗樣品和實驗者所擁有的儀器設(shè)備,此處所列步 驟僅針對培養(yǎng)細(xì)胞、實體組織、淋巴細(xì)胞和卵裂球(2-8 細(xì)胞胚胎)等材料,對其他材料(如干細(xì)胞克隆、胚囊、胚胎組織等),用戶需自行選用合適的方法制備單細(xì)胞。對已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞(如 FACS 分離細(xì)胞、卵細(xì)胞等)則可以跳過制備過程而直接進(jìn)入單細(xì)胞裂解步驟。
按下面手冊,本產(chǎn)品 1 次可以處理 1-1000 個細(xì)胞。下面的步驟是以制備單個細(xì)胞/裂解反應(yīng)為例,如果要制備 N 個細(xì)胞/裂解反應(yīng)的懸浮液,濃度需要相應(yīng)調(diào)整。
一、用培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶓w組織制備單細(xì)胞
1.按常規(guī)胰-酶方法處理培養(yǎng)細(xì)胞或組織(一般是用 PBS 洗滌兩次,再用 0.25 % Trypsin-EDTA 處理 2 分鐘),將細(xì)胞重懸于自備的液體細(xì)胞培養(yǎng)基中。
2.按常規(guī)方法對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。
3.轉(zhuǎn)移 100-4000 個細(xì)胞到新離心管中,400×g 離心 4 分鐘沉淀細(xì)胞,小心棄上清(培養(yǎng)基)。
4.將細(xì)胞沉淀重懸于 50 μL 自備的 PBS 溶液中,使其終濃度為 2-80 個細(xì)胞 / μL。
5.在干凈的培養(yǎng)皿上點加數(shù)個含 5 μL PBS 溶液的小液滴,也可以在 96 孔板或
0.2 mL PCR 管中進(jìn)行。
6. 在第一個小液滴中加入 5 μL 細(xì)胞懸浮液,然后再從第一個小液滴中轉(zhuǎn)移 5 μL 到第二個小液滴,如此系列稀釋樣品數(shù)次,使得其濃度接近每 2.5 μL 液體中含 1 個細(xì)胞,放冰上待用。二、用單細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞
7.在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 μL 樣品,確認(rèn)含一個細(xì)胞后,將其轉(zhuǎn)移到一
個含 2.5 μL 本產(chǎn)品的 PCR 管中。最好同時設(shè)置無樣品的陰性對照(2.5 μL樣品中不含細(xì)胞)。
8.細(xì)胞將在 5 分鐘內(nèi)裂解。
9.裂解液可以立即用于后續(xù)實驗(如 PCR 或 RT-PCR),也可以放冰上數(shù)小時待用。如果長期不用,需要放-80℃保存。使用時從-80℃中取出后,放冰上融化后即可使用。
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