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溶劑極性

介紹吸附薄層色譜前，應(yīng)熟知常用溶劑極性順序表，便于更好地應(yīng)用薄層色譜。常用溶劑極性順序為：石油醚<環(huán)己烷<四氯化碳<三氯乙烯<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<丙酮<正丁醇<乙醇<甲醇<水<乙酸。此外，常見化合物極性順序為：烷烴<烯烴<醚<硝基化合物<二甲胺<酯類<酮類<醛類<硫醇<胺類<酰胺類<醇類<酚類<羧酸類。

展開劑選擇

展開劑的極性越強，其洗脫能力越強，化合物的Rf值越大；反正展開劑極性越小，洗脫能力弱，相應(yīng)化合物的Rf值越小，一般要求選取合適的展開劑系統(tǒng)使化合物的Rf值控制在0.2-0.8以內(nèi)。展開劑選擇可以用點滴實驗法，將要被分離的物質(zhì)溶液點在薄層板上，揮干，用毛細(xì)管分別吸滿不同展開劑點到樣品點的中心，借毛細(xì)管作用，展開劑從圓心向外擴(kuò)展，出現(xiàn)不同的圓心色譜，選取zui合適的展開劑。如下圖，苯為zui合適的展開劑。

為了提高分離效果，經(jīng)常需要采用混合溶劑組成流動相，調(diào)整比例及更換展開劑組成來調(diào)整流動相的極性、互溶性、酸堿性和黏度，達(dá)到*的分離目的?；旌险归_劑中，弱極性溶劑系統(tǒng)一般由石油醚、苯、環(huán)己烷等組成，然后選擇性加入乙酸乙酯、甲醇、乙醇等；中等極性溶劑系統(tǒng)一般由三氯甲烷和水組成，用乙酸乙酯、甲醇、乙醇來調(diào)節(jié)，適合于蒽醌類或皂苷類成分分離；大極性溶劑系統(tǒng)一般由正丁醇和水組成，用乙酸乙酯、甲醇、乙醇來調(diào)，適合于極性較大的有機(jī)堿類化合物的分離。

薄層板的類別

常見的薄層板型號及代表含義如下表：

點樣

點樣形狀一般為圓形點，點樣基線距底邊1.0-1.5cm，點樣直徑為2-3mm，板原點直徑約為1mm，盡量避免多次點樣。點間距離根據(jù)斑點擴(kuò)散情況而定，一般薄層為1-2cm，薄層為0.5cm。用手工點樣時，應(yīng)該注意勿損失薄層表明，忌用嘴吹薄層板。

展開

點樣后的薄層板，置于密閉的層析缸中展開。展開劑浸入薄層板下端高度不超過0.5cm，保證點樣處不接觸展開劑。

對于某些復(fù)雜或難分離的成分，可采用雙向展開法或者二次展開法，雙向展開即在方形的薄層板的相鄰兩邊分別劃一條直線，相交于一點為原點，將樣品溶液點于此點上，先用一種展開劑沿著一個方向展開，吹干展開劑，調(diào)轉(zhuǎn)薄層板，再用另一種展開劑進(jìn)行第二次展開，對復(fù)雜難分離的樣品有較好的分離效果，如圖。

此外，展開后的板可能會出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。邊緣效應(yīng)是指點于同一薄層的同一物質(zhì)，展開后薄層板邊緣處斑點的Rf值與板中間的斑點Rf值有所不同，呈現(xiàn)凹形，如下圖。

邊緣效應(yīng)多出現(xiàn)在混合溶劑展開劑系統(tǒng)中，如果薄層板較大，展開時間長，展開劑揮發(fā)的速度不同，上行展開時，由于被吸附劑吸附較弱的弱極性或易揮發(fā)的溶劑，在薄層板邊緣易揮發(fā)，使薄層板邊緣部分溶劑極性比中間大，邊緣斑點的Rf值大于中間區(qū)域的；另一方面，薄層板背面蒸氣稀薄，導(dǎo)致板邊緣處蒸氣向背面移動，致使邊緣處蒸發(fā)掉的溶劑由溶劑貯存器得到補充，板邊緣與中心相比，有更多的展開劑沿邊緣移動，因此邊緣的斑點Rf值高于中間區(qū)域。

為了減少邊緣效應(yīng)，可采取以下辦法：

1. 使用雙槽的層析缸，一槽中放薄層板，另一槽加入展開劑待溶劑蒸氣達(dá)到飽和后再展開；

2. 在層析缸內(nèi)壁貼上浸濕展開劑的濾紙條；

3. 使用預(yù)制板；

4. 使用較小體積的合適的層析缸；

5. 將斑點盡量點在靠中間區(qū)域；

6. 采用狹薄層板代替寬薄層板；

7. 選擇適宜的單一展開劑代替混合展開劑；

8. 采用共沸溶劑代替一般混合溶劑。

斑點的檢識

色譜斑點的檢識包括光學(xué)檢出法和試劑顯色法。

光學(xué)檢出法分三種情況：

1. 化合物本身有色，在日光下可直接觀察；

2. 化合物在可見光下沒有顏色，但可吸收紫外光并發(fā)射更長波長的光而呈現(xiàn)不同顏色的熒光斑點；

3. 在可見紫外光下都不顯色，也沒有合適顯色方法的，可以用熒光薄層板，化合物在紫外燈下可在熒光背景下顯示暗斑。這是因為這些化合物減弱了吸附劑中熒光物質(zhì)的紫外吸收強度，引起熒光猝滅。

試劑顯色法包括以下三種：

1. 噴霧顯色，將顯色劑噴灑于薄層板（硬板）上，根據(jù)顯色原理不同，可直接顯色或加熱顯色。

2. 浸漬顯色。

3. 蒸氣顯色：如碘蒸氣，揮發(fā)性的酸、堿，如鹽酸、硝酸、濃氨水、乙二胺等。

   
    

異常斑點的對策

7.1 拖尾  

拖尾在薄層中較常見。引起拖尾的原因有以下幾點：1.點樣過量，由于吸附劑負(fù)載樣品能力有限，超載的樣品被拋在后面，形成拖尾。2.重復(fù)點樣，重復(fù)點樣時每次中心未重合，使點樣點呈橢圓形，形成拖尾。3.硅膠死吸附大的化合物亦易形成拖尾，如多羥基化合物，有機(jī)酸，糖苷等。根據(jù)上述原因，濃的樣品可以稀釋之后再點樣；重復(fù)點樣樣品控制手不發(fā)抖或者每次點樣都控制點在同一位置；加入酸堿等改良劑來減少拖尾現(xiàn)象。

7.2 念珠狀斑點  

由于化合物斑點之間距離小，相互連接呈念珠狀。引起原因有：1.樣品成分復(fù)雜過多，在短的薄層板上達(dá)不到分離效果，彼此重疊。2.重復(fù)點樣時，中心不重合，形成復(fù)斑。采取措施：適當(dāng)增加薄層板的長度或采用二次雙向展開；重復(fù)點樣時，每次點樣中心應(yīng)重合。

7.3 Rf值不穩(wěn)定  

重復(fù)操作時同一樣品Rf值不穩(wěn)定，時高時低。如下情況導(dǎo)致此現(xiàn)象：1.層析穩(wěn)定不穩(wěn)定，特別是使用混合展開系統(tǒng)時，溫度不穩(wěn)定導(dǎo)致展開劑比例變化；2.人為操作不當(dāng)，吸取或加入展開劑時不迅速，或加入展開劑時未及時將層析缸蓋上密封；3.薄層板厚薄不均勻；4.溶劑質(zhì)量不同。對策：如果用電吹風(fēng)吹干層析缸時一定待層析缸冷卻至室溫再展開；養(yǎng)成正確的實驗操作習(xí)慣；選取厚薄均一的薄層板；選擇質(zhì)量好的溶劑。