目的：采用液相色譜與三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，為尿液中 EtG 和 EtS 的法醫(yī)毒物學(xué)分析開(kāi)發(fā)耐用靈敏的 LC-MS/MS 分析工作流程。
前言：*，乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS）可作為監(jiān)測(cè)乙醇消耗量的生物標(biāo)志物。雖然它們是乙醇的次生代謝產(chǎn)物，但由于半衰期較長(zhǎng)，因此可在法醫(yī)研究中被用于檢測(cè)過(guò)去是否服用過(guò)酒精。
實(shí)驗(yàn)：
樣品制備：將等體積（50 µL）尿液與內(nèi)標(biāo)化合物（5000 ng/mL EtG-d5 和 500 ng/mL
EtS-d5）混合，然后用 900 µL 的水稀釋 20 倍。將 5 µL 樣品進(jìn)樣至 LC-
MS/MS 系統(tǒng)。
液相色譜方法
采用 Thermo Scientific TM VanquishTM Flex HPLC 系統(tǒng)和Phenomenex ® Synergi TM Hydro 反相色譜柱（100×3 mm，2.5 µm 粒徑）進(jìn)行色譜分離。流動(dòng)相 A 和 B 分別為含0.1％ 甲酸的水和含 0.1％ 甲酸的甲醇溶液，溶劑分別為Fisher Chemical TM Optima TM 級(jí)水和甲醇?？傔\(yùn)行時(shí)間為6 分鐘。
質(zhì)譜方法
采用配置加熱電噴霧電離探針的 TSQ Quantis 三重四極桿質(zhì)譜進(jìn)行分析。表 1 顯示了質(zhì)譜儀的離子源參數(shù)
分析 EtG、EtS 及其氘化內(nèi)標(biāo)化合物時(shí)同時(shí)監(jiān)測(cè)了兩種選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）離子對(duì)，用于離子比率確認(rèn)（IRC）。在分時(shí)選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（t-SRM）模式下進(jìn)行掃描，循環(huán)時(shí)間為 0.4 秒。表 2 顯示了本次分析中使用的 SRM 離子對(duì)信息。
數(shù)據(jù)分析：采用 Thermo Scientific TM TraceFinder TM 軟件采集并處理數(shù)據(jù)。
評(píng)價(jià)
通過(guò)分析校正曲線，然后同一樣品重復(fù)進(jìn)樣六次作為質(zhì)控樣（QC），測(cè)定分析精密度和準(zhǔn)確度。通過(guò) 17 個(gè)不同批次人尿液中的內(nèi)標(biāo)信號(hào)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。
結(jié)果與討論
將 EtG 和 EtS 的定量限（LOQ）定義為根據(jù)線性校正曲線反算得到的校正物濃度位于理論值 20％ 范圍內(nèi)、離子比率在目標(biāo)物 20% 范圍內(nèi)且重復(fù)進(jìn)樣的 %RSD 低于20% 時(shí)的低濃度。正常尿液中 EtG 和 EtS 的 LOQ 分別為 100 ng/mL 和 10 ng/mL。圖 1 顯示了各分析物在LOQ 下的提取離子流圖。圖 2 顯示了兩種化合物的校正曲線。
重復(fù)進(jìn)樣校正濃度范圍內(nèi)的質(zhì)控樣品時(shí)，該方法呈現(xiàn)出*的精密度。EtG 的 %RSD 小于 9.8％，EtS 的 %RSD小于 4.0％。此外，17 個(gè)不同批次的正常受試尿液中未觀察到明顯的基質(zhì)效應(yīng)。圖 3 顯示了與校正樣品相比，不同批次尿液的內(nèi)標(biāo)峰面積回收率。
結(jié)論：
• TSQ Quantis 三重四極桿質(zhì)譜儀為尿液中 EtG 和 EtS的分析提供了的靈敏度和耐用性。
• 采用該方法分析尿液中的 EtG 和 EtS 時(shí)，定量限分別為 100 ng/mL 和 10 ng/mL。
• 該方法適用于法醫(yī)毒物學(xué)分析
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