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食品中添加劑檢測前處理過程十分繁瑣，之前介紹過食品中維生素ADE的方法，通過雙三元液相全自動在線二維分析技術(shù)，可以省去繁重的離線制備過程，分析效率得以飛速提升^[1]。此次賽默飛針對低含量VB12添加的飼料檢測，同樣輕松應(yīng)對難題，解放雙手，工作效率倍增。

飼料維生素檢測難點(diǎn)

現(xiàn)行有效的國標(biāo)方法主要有“添加離子對試劑的反相液相色譜分析方法”以及“使用氨基柱的色譜分析方法”^{[2] [3]},可前者見VB12的色譜保留存在難點(diǎn)，離子對色譜法平衡時間較長；后者氨基柱法需特別注意柱子的使用范圍，對于習(xí)慣使用普通C18柱分析的用戶而言不太適應(yīng)。

國標(biāo)對于低添加VB12預(yù)混合飼料的指導(dǎo)（樣品溶液中維生素B??濃度小于2μg/ml），需要進(jìn)行離線的樣品富集、凈化步驟，常用手段包括固相萃取以及免疫親和法^[3][4]，首先需要進(jìn)行一次富集處理，多批次樣品送檢過程繁瑣且時間較長。

對癥下藥——雙三元液相在線富集、除雜

使用賽默飛雙三元液相系統(tǒng)，樣品只需簡單超聲過濾即可大體積直接上樣富集、除雜、分析，整個過程全部實(shí)現(xiàn)自動化。下面是雙三元液相在線富集、除雜、分析的自動化工作流程：

樣品凈化

轉(zhuǎn)移 / 分離

分離 / 再生

賽默飛雙三元特色方案介紹

賽默飛基于雙三元液相平臺開發(fā)了維生素B??全自動在線樣品富集測定方法，樣品超聲后過濾即可直接上樣測定。

相比采用離子對色譜冗長的平衡時間，該法具有分析時間短，峰形良好的優(yōu)點(diǎn)。

Thermo Scientific™ UltiMate™ 3000

雙三元系統(tǒng)

雙三元系統(tǒng)測試結(jié)果^[5]：

VB12標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

VB12實(shí)際樣品溶液色譜圖

本方法重現(xiàn)性良好，連續(xù)6次進(jìn)樣重現(xiàn)性RSD=0.48%，且通過色譜柱優(yōu)化，相對于國標(biāo)方法而言，峰形更加良好（參見下圖國標(biāo)方法色譜圖），且自動化程度高，大大提升了分析效率。

維生索B??標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（氨基柱)見圖A.1；維生素B??標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（C??柱）見圖A.2。

圖A.1 10μg/mL 維生索B??標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（氨基柱）

圖A.2 10μg/mL 維生索B??標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（C??柱）

參考文獻(xiàn)：

【1】在線二維液相色譜法同時測定嬰幼兒和成人配方營養(yǎng)品中的維生素A、D3和E （張艷海，其布勒哈斯等， 色譜， Vol.33 No.3 291-297）

【2】GBT9841-2006: 飼料添加劑維生素B12粉劑

【3】GBT17819-2017:添加劑預(yù)混合飼料中維生素B12的測定液相色譜法

【4】GBT5009.217-2008:保健食品中維生素B12的測定

【5】AN_19026_HPLC_食品_Ultimate 3000 在線凈化富集法測定預(yù)混合飼料中Vitamin B12?

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